二氧化氯（消毒剂）对灵芝菌丝生长的影响

春雨菌业

灵芝作为药用真菌其功效已家喻户晓。近年来灵芝作为保健食品和美容化妆品的添加剂，其应用日益广泛。传统方法栽培灵芝，培养料均要高温灭菌。笔者在筛选灵芝培养的消毒剂时，发现二氧化氯对各类微生物都有较强的杀灭和抑制作用，而且对人畜无害［1］，但对灵芝菌生长却作用甚微。本文初步研究了不同浓度二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响，以及7种不同灵芝菌耐受二氧化氯的能力。　　1  材料与仪器
　　1.1   供试菌种 赤芝（ganoderma.lucidum）as. 565，由本系提供。美国灵芝、日本灵芝、惠州灵芝、信州灵芝、紫芝、黑芝均购自山东金乡真菌研究所。杨树菇、云芝、茯苓、茶新菇、金针菇均购自华中农业大学。霉菌（黑曲霉、根霉、青霉），细菌（大肠杆菌、枯草杆菌）由本系提供。
　　1.2   斜面培养基（%）马铃薯（去皮）20；葡萄糖 2；kh2po4 0.3；mgso4?7h2o  0.15；琼脂 2；ph6.5。
　　1.3  摇瓶种子和发酵培养基（%）葡萄糖20 g；蛋白胨10 g；酵母膏2 g；水1 000 ml；ph自然。
　　1.4  药品二氧化氯（clo2）为深圳市科瑞德消毒用品科技开发有限公司产品，商品制剂 clo2含量为2%（w?v-1），用前加适量柠檬酸活化。其他化学试剂均为国产分析纯。
　　1.5  仪器恒温培养箱 pyx-dhs-60x75-bs  上海跃进医疗器械厂，高温消毒柜 tomyss-325  tomy kogyo co.ltd.日本，mfs-11多功能三维旋混仪（摇瓶机） 深圳潘西诺生物科技有限公司。
　　2  方法
　　2.1   clo2对霉菌和细菌的抑制作用每个培养皿中加入20 ml斜面培养基，趁热加入 clo2，摇匀，使 clo2制剂最终浓度为0.1%～1.0%（每100 ml培养基中加 clo2制剂0.1 ～1.0 ml），以未加 clo2并经高压灭菌过的培养基作为对照。涂布法接种霉菌和细菌，每个浓度每种菌各接3个培养皿，霉菌置于28℃、细菌置于37℃恒温培养，隔天观察生长情况，培养5 d。
　　2.2  clo2对赤芝的抑制作用 方法同上述，clo2浓度为0.1%～5.0%，每个浓度设3个重复。接入赤芝菌丝，置于28℃恒温培养，隔天观察菌丝生长情况，培养10 d。                           
　　2.3   clo2对其他种灵芝及食用菌的影响根据上述实验结果，确定培养赤芝时 clo2的最适浓度为0.7%。在斜面培养基中，加入 clo2，使其最终浓度为0.7%。接入其他灵芝菌和食用菌，每种菌种设3个重复，培养8～12 d。
　　2.4  clo2对灵芝摇瓶培养的影响 将葡萄糖、蛋白胨培养基1 000ml装入3 000 ml三角瓶中，加入0.7%  clo2，立即用保鲜膜密封,摇匀,放置1 h，然后用灭过菌的棉塞替换保鲜膜，另设对照组，接入赤芝液体菌种，接种量10%。放入多功能三维旋混仪中培养，摇瓶温度30℃、转速为150 r/min。摇瓶3～4 d，发酵液有浓厚的灵芝特有的气味，并伴有大量的菌丝球时，可终止发酵。将发酵液在100目筛网中过滤，用自来水反复冲洗，然后将菌丝体置于80℃烘干至恒重，称重。以每升培养基中含菌丝干重表示（g?l-1）。
　　3  结果
　　3.1   clo2对霉菌、细菌的抑制作用由表1可知，对照管5 d之内都长满，而0.1%～1.0%的 clo2对上述微生物有明显的抑制作用。其中真菌比原核微生物耐受 clo2的能力强。
　　表1  clo2对霉菌、细菌的抑制作用（略）
　　+++表示菌丝或菌落长满平板；-表示无菌丝或菌落生长
　　3.2   不同浓度 clo2对赤芝的抑制作用由表2得知，clo2浓度在0.6%～0.7%时对赤芝有一定的抑制作用，使得赤芝萌发比对照晚2 d，但菌丝长满平板的时间均为10 d。clo2浓度在0.8%～1.0%时，对灵芝的生长有明显的抑制作用，浓度2.0%时完全抑制赤芝菌丝的生长。
  
　　根据上述的结果，培养赤芝时，选用 clo2的浓度为0.7%，此浓度对霉菌和细菌抑制作用强，但对赤芝的生长影响不大。
　　3.3  0.7% clo2对其他灵芝菌及食用菌的抑制作用表3中每种菌都设有对照组，其8～10 d菌丝都能长满。表3中0.7% clo2能完全抑制紫芝的生长，原因还有待进一步研究。另外实验所选用的几种食用菌都有明显的抑制作用。
　　表2  不同浓度 clo2对赤芝的抑制作用（略）
　　+++表示菌丝或菌落长满平板；-表示无菌丝或菌落生长
　　表3  0.7% clo2对灵芝菌及食用菌的抑制作用（略）
　　3.4   clo2对灵芝液体培养的影响由于多功能三维旋混仪每次只能放2个3 000 ml的三角瓶，因此摇瓶试验需分批进行。结果见表4。
　　表4  灵芝菌在摇瓶培养基培养的结果（略）   
  
　　由表4得知，对照组的平均产量是4.66g，实验（批号）组平均的产量是4.38g。实验组在摇瓶过程中没有染菌，只是发酵周期比对照组多1 d。实验中发现：实验组的摇瓶棉塞需经高温灭菌，提示发酵罐实验需要无菌空气。摇瓶培养基配比和发酵罐试验有待进一步研究。
　　4  讨论
　　4.1  添加 clo2的平板应用于灵芝子实体菌丝分离，尤其是野外菌种采集，效果良好。
　　4.2   clo2可应用于本实验条件下灵芝菌丝液体培养，工艺简单，生产成本低。
　　参考文献：
　　［1］  张  鑫. 二氧化氯的应用和研究［j］.安徽农业大学学报,1996,23（4）：610.
　　［2］  曾东方，罗信昌. 强力安对食用菌生产中杂菌的毒力测定［j］.微生物学杂志,1998,18（3）：37.
　　基金项目：广东省深圳市自然科学基金资助项目（no.00107078）
　　(深圳职业技术学院，广东 深圳   518055)　摘自：时珍国医国药