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某工厂摇瓶菌种死亡或不生长原因分析

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    发表于 2019-3-31 22:53:50 | 显示全部楼层 |阅读模式


    某工厂摇瓶菌种死亡或不生长原因分析
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          摇瓶菌种是从试管母种到发酵罐培养的中间阶段。成品率的要求同试管母种一样,是要求必须100%的。
           一般来说,摇瓶菌种的培养相对于发酵罐培养来说,环境优良,影响因素明确,可控性强,是比较简单的。
         正是因为简单,往往在操作中疏忽某些因素和变量,长久持续的做精做好就不容易。
          平时注意做好基础功夫,学习一种分析问题的思路,比直接得到标准答案 更能学到知识。

    下面介绍作者参与分析某厂的具体事例,摇瓶菌种不成活的问题,分享一下分析问题的思路。
      某厂是应用液体菌种进行黑木耳菌包工厂化生产。日产10万袋,平均日制作发酵罐3罐。菌种技术员有一定的基础知识和生产经验,前期该厂,摇瓶菌种已生产两个来月,制作摇瓶200来瓶,全部正常。
          而在3月初期,前后相隔不久,有两天的摇瓶,发现摇瓶菌种异常,接种块不成活。因为是摇瓶菌种,事关重大,需要紧急解决问题。
          经仔细询问,一起探讨,把所有的相关因素全部排查,排查环节和改变方案如下:
    1 试管母种,操作标准,检查严格,确定本身无污染。硅胶塞封口 冰柜存放两个月,活化时有遇30多度高温,或者有冷凝水。
           检验方案:马上制作一批细菌检测试管,转管培养,同时,把转接摇瓶以后的剩余试管28度恒温培养观察。
        2 配方,无改变。水,重测pH值。pH7左右,中性微酸。
    3  培养基装瓶方法正确无误。棉塞方面,棉塞重复使用,有嫌疑。拆开棉塞观察,棉花洁净,干燥。松紧合适。
        棉塞问题,大概排除。为保障起见,每批换新棉花,重做新棉塞。
    4 灭菌,排气基本能保证彻底,冷却阶段,不十分确定,因人员紧张,忙于别事,有自然降压到零,瓶内形成负压倒吸的可能性。
         改进计划是:仍旧执行老工艺:排冷气5分钟,灭菌结束后,人工值守降温,锅内略有压力时,缓慢泄压放气,绝对保证内部微正压,严禁负压。
    5 接种设备。超净台,初期检测合格,超过一个月未做杂菌检测,超过一个星期未做全面擦洗消毒。
        此处是风险因素之一,改变办法是:每次操作结束全面酒精擦洗一次,结合紫外线照射消毒30分钟,一个星期做一次 平板检测。
       立刻做平板检测,动态下,做2个批次平板检测,结果: 菌落合格。
    6  操作手法。程序无改变。但有遇突发情况,当时没注意。有几天气温升高,实验室室温较高;操作手法也有细微改变,接种工具消毒时间可能有延长,而冷却时间没有相应延长,有造成烫伤菌种的可能性。
            改变办法是:延长在无菌环境下的工具冷却时间。确保冷却完全。
    7 操作不规范或工具消毒不彻底造成的污染:可能性极微。不萌发的培养液pH正常,气味无异常,无异味。因污染造成抑制菌种的可能性也较低。
    8 同期制作3瓶,有一瓶萌发正常,间接说明母种正常。未萌发的菌种块表面光滑,无菌丝生成,颜色乌黑灰暗同斜面培养基一个颜色。
         转接细菌培养基检测的菌种样品,和剩余菌种培养,萌发正常,菌种本身的原因基本排除。
         但为保障起见,立刻转接新试管,冰柜保存的菌种,控制在两个月以内。
    9 培养:有高温现象。因气温升高,室温也相应升高,加温空调测温不准,室内实际气温短期内超过30余度,实测摇瓶间隙,和培养液温度更高 是不利因素之一。
         改变办法是:把恒温室加热空调关闭,或维持在室温20度,仍用恒温箱,培养温度严控在适宜培养温度。
    10 培养环境:每天消毒液擦洗地面,定时紫外线照射,加强培养室和实验室环节消毒。
           分析结果,主要怀疑接种工具和冷却不彻底而烫伤菌种。但同时其他环节也有相应风险因素。因为生产紧迫,没法做单因素分析,只能综合改进。按改进后的程序,继续做几十个批次,完全正常。
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