黑木耳原种（二级菌种）制作技术

春雨菌业

一、原种的科学配方

    1、 废旧阔叶树叶粉60斤，玉米芯或棉籽壳（粉至绿豆粒大小）、豆秸秆粉20斤，玉米粉5斤，黄豆粉2斤，石膏粉1斤，葡萄糖1斤，水分60~65％，pH值5.5~6.5 。

    2、 玉米芯（粉至绿豆粒大小）65斤，豆秸秆粉15斤，玉米粉5斤，石膏粉1斤，石灰粉0.3斤，维生素B1 50片（含量10毫克），水分60~65％，pH值6~7。

　　3、玉米大馇子80斤，锯末屑10斤，石膏粉1斤，水分60~65％，pH值5.5~6.5 。特别注意：在制作玉米馇子菌种时，应使玉米馇子内部浸泡或煮至没有白心为宜，千万不能把玉米馇子浸泡内部有白芯或煮开花。

　　4、葵花秆或阔叶树小细枝桠条80斤（枝条长以18cm为宜，枝条粗细直径以0.6~1cm为宜），

祥细制作过程请参见：2.各种培养基的配制方法（短枝条配制方法5 ）。。

    5、 锯末屑75斤，豆秸秆15斤，玉米粉5斤，黄豆粉2斤，石膏粉1斤，葡萄糖粉1斤，水分60~65％，磷酸二氢钾0.2斤，硫酸镁0.1斤，pH值5.5~6.5 。

　　　

　二、 培养基的制作方法

    1、废旧树叶培养基的配制方法

　　首先称取所需数量的干玉米芯粉碎原料提前8~10 h摊放在水泥地面上，用喷壶往玉米芯培养料上面浇清水拌料，充分使玉米芯原料水分吃透后备用（配方中加豆秸杆粉或棉籽壳不需提前加水焖堆）。之后在称取所需数量的干树叶粉摊放在水泥地面上，把玉米芯、豆秸秆、棉籽壳等放入树叶粉中干料拌均后，再把玉米粉、黄豆粉等均匀地撒在树叶粉上面，继续干料混合拌均。然后把石膏粉、红糖等用清水分别溶化后均匀地泼在干料上，要求随拌料随泼水，培养料湿料拌均后，用每cm2 1个孔的电动筛筛湿料1~2遍，使湿料无块更均匀，含水量达到60%为宜，即双手用力搓料，手掌面有光泽湿润感而不能有存水为宜。黑木耳是喜微酸性的环境生活，其生活基质的适宜酸碱度以5~6.5为宜。又因各地水质不一样，ＰＨ值偏碱或偏酸，应先用标准ＰＨ值试纸查出准确的数值后，在决定增和减ＰＨ值的高低。如培养基偏碱可用5％乳酸溶液、硝酸、柠檬酸、醋精等溶液调解。偏酸可用白灰调解。

　  2、玉米芯培养基的配制方法

　  先将玉米芯提前8~10 小时用清水拌料，充分使玉米芯原料水分吃透后，在把豆秸秆粉、玉米粉干料拌均，将石膏粉、石灰粉、维生素分别放入水中溶化后，均匀的泼在培养料上。然后，边加水边拌料，使各种原料湿料拌均匀，培养料水分达到60％，闷堆2小时使玉米芯充分吃透水分（特别注意：玉米芯培养基如果水分吃不透，蒸锅灭菌不彻底，很容易出现大量杂菌。所以，玉米芯培养料在拌料时必须吃透水分）。待达到所需含水量后即可装瓶或装袋。

　　3、玉米大馇子培养基的配制方法

　　将所需数量的玉米馇子（脱皮后的大馇子）放入容器内，加清水超过玉米馇子浸泡（也可直接用大锅煮料，使玉米馇子煮至熟而不烂、但不能开花即可捞出），夏季每天换两次水，冬季24 小时换一次水，泡至玉米馇子掰开观察，使玉米馇子浸透，即玉米馇子内部中心点没有 白心时，用笊篱捞出，再用清水冲洗几遍，使大馇子没有碎杂物和粘液。洗完后再用笊篱捞出，离干玉米馇子表面的水分，摊放在水泥地面上或木槽内。然后把干锯末屑和石膏粉混合拌匀后，在和已泡好的玉米大馇子湿料拌均，使培养料水分达到57％，即可装瓶。（此培养基不易装袋制种）。

　　4、短枝条培养基的配制方法　　

　　首先称取所需数量的已加工好的葵花秆或枝条放入容器内，加清水超过葵花秆或枝条浸泡，同时每100斤水中加入磷酸二氢钾0.2克、硫酸镁0.1克、维生素B1 100片（含量10毫克）、葡萄糖50克，浸泡6~8小时，使葵花秆或枝条泡透后，用笊篱捞出，篱干葵花秆或枝条外皮的水分，即可装袋。装袋前先把袋底放一层常规配制的湿树叶粉或其它培养基，之后，把葵花秆或枝条站笠放入袋中，装入袋内的葵花秆或枝条要求越紧越好。待葵花秆或枝条装满袋后，上面在放一层培养基，稍压实后，套上径圈，塞上棉塞或无棉盖体。

　　5、锯末屑培养基的配制方法

　　将枝桠锯末、豆秸秆粉混合干料拌均后，在把玉米粉、黄豆粉等均匀地撒在枝桠锯末上面，继续干料混合拌均。将石膏粉、葡萄糖分别放入清水中搅拌溶化，均匀地泼在干培养料上。然后，边加水边拌料，使湿料拌匀，在用电动筛把湿料筛1~2遍，含水量60~65％，即双手用力搓培养料，手掌面有光泽湿润感而稍有存水，但不流水为止，用手紧握料成团，扔下料即散开。

　三、装袋与灭菌过程

　

　　1、装袋：菌袋选用16cm×33cm×4.5丝厚合格的聚乙稀袋，培养料湿料拌均后。开始用防爆壳式装袋机完成，一般装袋机每小时可装800~1000袋左右。要求装料压平，压实料面，装入袋内培养料的高度以16cm为宜，在料袋中间用0.5cm的圆木棒扎一个深眼至袋底。之后，套上径圈和无棉盖体。

　　树叶粉、玉米芯、棉籽壳、枝桠锯末培养料的优缺点：每个配方可装原种80~100袋左右。它具有成本低、污染杂菌少、成品率高、菌种保存时间长等优点。缺点：菌丝发酵慢、时间长，一般从接种到菌丝长满全袋，在24~27℃下，需30~45天左右。

　　玉米大馇子、玉米粒培养料的优缺点：每个配方可装270袋左右。一般每袋需干玉米粒、大馇子130 克左右。它具有菌种萌发快、菌丝生长快，在适温下菌丝粗白，在转接栽培种时萌发速度快，该培养料在适温下，只需18~20天菌丝可长满全瓶。缺点：需要浸泡或煮料过程，费工、成本比用树叶粉、玉米芯、棉籽壳、枝桠锯末培养料高。如培养料浸泡水分过多时,易出现细菌性杂菌污染致使培养料酸败腐烂。

　  2、 原种料袋灭菌方法

　　制作原种时，必须当天拌料，当天装瓶（袋）和灭菌（如条件允许，也可在零上5~10℃以内短时间保存）。以免因温度高、时间长使培养料酸败变质造成不必要的经济损失。

  （1）高压蒸汽灭菌法

　　料袋灭菌：按上述高压蒸汽灭菌锅灭菌方法进行。不同之处应从第一次当高压蒸汽灭菌锅压力表指针升到0.5kg/cm2压力（温度110.05℃）时，慢慢旋开放气阀排气，待冷空气全部排尽后，压力表针降到零位时，继续急火加热，使放气阀往外排直气时，关闭放气阀。当压力表指针重新升到1.4kg/cm2压力时（温度125.9℃）时，保持压力不在升高和降低，继续灭菌2.5~3小时后，停止加温，之后按上述方法进行。注：采用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，不论前期排放冷空气或灭菌完毕后排放蒸汽过程，都必须漫漫排放，如排气过快易造成料袋膨胀或破损及棉塞脱落。

　（2） 常压蒸汽灭菌法

首先把蒸锅内加足水，之后，把料袋全部装入蒸锅后，点燃火，配用1.1千瓦引风机急火加热，一般从点火到蒸锅上大气（100℃），最好在3~3.5小时内达到。如长时间达不到100℃，很容易使料袋内的培养基酸败，造成损失。待锅内温度达到100℃时，一般每锅装1500~2000个料袋需保持100℃灭菌8~10小时（随着每锅料袋数量的增加，蒸锅灭菌时间也随之延长）后，停止加温，此时停用引风机。在继续闷锅6小时后即可打开蒸锅门。  

　 4. 料袋接种与菌丝培养

  （1）接种方式

　 电子臭氧灭菌器接种方法　   首先把接种室内的杂物等全部清理干净，事先在接种室上方安装两只40W的紫外线灯管备用。把已灭好菌的料袋（瓶）和所需的接种工具及菌种一起放入接种室内。工作台上放好臭氧接菌器，接菌器上方安装一个270W的红外线灯，之后，打开接种室紫外线灯和接菌器的双开关，同时每m3空间用3%的来苏儿消毒净化一下空间。紫外线灯应预照10分钟，待紫外线光波稳定后，继续消毒灭菌30分钟后关闭，待20分钟后开始接种，待料袋内部温降至10℃以下开始接种，接种时工作人员戴上口罩和医用手套，手套用75%酒精棉擦洗一遍，之后用3%的来苏尔溶液消毒工作台和净化空间烟雾及灰尘，打开百净风3分钟后，在接菌器前10㎝处（消毒区），把试管（母种）固定在接种架上，拔掉试管棉塞，接种钩应严格通过酒精灯火焰烧红灭菌，待接种钩烧红后，放入75%的酒精内快速冷却，之后拿出接种钩并点燃沾在接种钩上面的酒精，待自然燃烧后，伸入试管内部把母种培养基前端2cm切割钩出后，在把母种培养基横切分成5~10块，然后钩出一块菌种，料袋口对准试管口，直接把菌块接入袋内(每支母种可转接5袋原种），在消毒区内迅速塞好棉塞或盖上无棉盖体，即接完1袋。按照上述操作把全部料袋接完菌种为止。注意事项：接种时的试管口，料袋口及拨棉塞和塞棉塞时都必须在百净风消毒区进行，否则易污染杂菌。

  （2）原种菌丝培养

　接种后的料袋迅速移入培养室内的多层发菌架上或直接吊袋发菌（培养室吊袋发菌方法及消毒灭菌等详细过程，请参阅聂林富研发的栽培种立体吊袋菌丝培养新技术一文）。发菌期间，保持培养室越干燥越好，地面撒一层干石灰粉防潮防杂菌。接种前5~10天内，室内温度以28~30℃（但温度不能超过30℃以上）为宜。之后，当菌种块萌发并菌丝封满料面时，室内温度也逐渐增高，这时应把室内的温度降至到24~25℃，待料袋菌丝长至三分之二时，室内温度应继续下降到20~22℃，直到菌丝长满全袋为止。发菌期间应经常通风换气，保持室内环境清洁卫生。玉米大馇子、整玉米粒培养基，发菌10天后，当料面菌丝直径达到4~5cm圆球状时。（注意：发菌期间禁止晃动料袋，以免培养料接触到无棉盖体上，否则易污染杂菌）。每天检查一次有无杂菌，如发现料瓶或料袋内培养料上出现红、绿、黑、黄等异常颜色即是杂菌，应立即拿出隔离培养室。该培养基待菌丝全部长满袋，在继续培养一周后，使菌丝充分吃透培养料内部，表面形成富有弹性洁白菌丝后即可使用。这样的菌种生命力强，接种后菌种萌发快、长势旺、抗杂菌能力强、菌种成品率高。树叶粉、棉籽壳、枝桠锯末、玉米芯培养料，待菌丝全部长满袋后，室温降至18℃以下继续培养6~10天后使用。