食用菌接种室设计

春雨菌业

第一章　食用菌接种室洁净度的确定　　（固体菌种  金针菇）
　　关于食用菌接种室洁净级别的标准大多数认为以应不超过10000级为宜即直径90mm皿—0.5H—30min<=3个，洁净级别高，空间杂菌数量少，肯定能提高接种的成功率，但相应的投资成本和管理维护成本也会上升，而在实际生产中却很少有人能做到达一万级的洁净度（接种箱可达到，除外），本人根据通过对开放式接种室洁净度进行近200次的检测和对接种后污染情况的调查表明：以接种污染率最高不超过2%为设计标准，接种室洁净度级别根据实际需要确定在10万级至30万级较为适宜。
　　当然，接种室的洁净级别能达到一万级那是更好了，但适不适宜作为行业标准，还需根据行业发展水平和实际需要而定。一万级接种室需要根据洁净室的设计理念和标准进行设计、施工、管理、维护保养，还应配备相应的管理人员和设备维护人员，不是现有小工厂随随便便就可以搞好的，重要的是相对于30万级的接种室一万级接种室建设管理维护的成本消耗所带来的成品率提高效益远高于其增加的投资成本。
　　通过检测表明，在对接种室进行规范消毒后很容易达到一万级，但我们需要的环境无菌度是在接种过程能保持这种级别状态，即使工作人员进行非常规范的更换无菌工作服、风淋后进入接种室，其洁净状态也将在短短几分种之内急剧恶化（在无净化设备对室内空气进行处理的情况下），一万级状态在5分钟之后将变为十万级，10分钟即可达30万级，随着作业时间的延长空间杂菌数还将增加。即使在室内有一定净化设备的条件下，要想一直保持十万级也将非常困难。曾检测过工作人员进入接种室后工作30分钟在不开净化设备时的洁净度，每个培养皿平均菌落数达12个/5min以上，已远超过中国1998GMP规定的最低标准，无级了，但即使在这样的条件下接种至二小时，最后的接种污染率却也仅在0.5%左右。
　　食用菌接种室的设计一般参照微生物实验室的标准，但物种的抗性和生产特性毕竟不完全相同，食用菌需要的是纯培养，但并不一定代表需要我们接入的菌物或培养基自身一点杂菌没有，真正能做到这样毕竟好，但在实际生产中却很难做到都这样，因此我们可把标准降一降，只要能保持正常生产，在成品能得到保证的情况下以实际需要出发来制定标准，来指导生产，不需要一味的去求好，求高。是的，也许在这样的低环境条件下接种菌包被带入了杂菌，但这不代表我们的菌包就污染了，不能用了，需知任何菌物都有其一定的抗性，且杂菌也并不是落地就生根，造成危害，它也需要在适合它生长的条件下才能生长发育，。其实在生产中有很多这样的例子，比如毛木耳、平菇的开放式接种，普通的接种账随便熏熏就接种它们的接种成品率也很高，而那样的条件恐怕得达到一千万级了吧。
　　所以我认为一般的袋式金针菇生产的接种室洁净度能达到三十万级就可满足要求（小于等于15个/皿*30min)。
第二章    食用菌接种室设计的环境参数　　1.净化级别：30万级，以菌落计平均在10~15个/皿*0.5小时（所有菌落并非都是食用菌有害菌，比如金黄色葡萄球菌直径0.3~1.2微米，一部分可以通过0.5微米高效过滤器，也可在平皿上形成菌落，但它不能在普通食用菌培养基造成危害，即杂菌对生存环境也具有选择性，所以具有针对性的控制食用菌危害菌才更具有现实意义）
　　2.类别：食用菌洁净室
　　3.气流状态：乱流洁净室，整体气流以不均匀速度呈不平行流动，伴有回流或涡流。
　　4.换气次数：5~8次/小时，总换气数＝总风量*出风效率/接种室体积。
　　5.静压差：与相邻环境的空气压力差值，不低于5帕，即接种室压力大于缓冲间，缓冲间大于外界。
　　6.温度：16~20度
　　7.湿度：小于90%
　　8.照度：一般照明，70~150lx
　　9.布局（人净路线）：辅助区（贮物间,更衣室）——>接种室外走道——>人身净化（缓冲间，更换无菌工作服，人手消毒）——>接种室
　　10.建筑要求：（六面光）
　　10.1  材料：表面光滑，耐磨，绝热，不吸湿、透湿，易加工，表面不易附尘土，易去尘，便 宜。
　　10.2  地面：耐磨，耐侵蚀，易清扫，可采用水磨石，涂料，瓷砖等）。
　　10.3  墙面：不易脏，易清洁，表面光洁，耐冲击，可采用瓷砖，彩钢板，防霉涂料，树脂漆，装配式洁净室壁板等。
　　10.4　吊顶：为减少投资和方便维护普通接种室可不必吊顶，施工可参考墙面。
　　注意：食用菌接种室所使用材料一定要注意防水，因为接种室相对湿度一般较大，且经常需要用水擦洗和用消毒水冲洗，以防不不防材料的受潮变形或被侵蚀，需要使用石膏是一定要使用防水石膏，且不得作为罩面材料。
　　11.造价（仅供参考）
　　以办公楼作对照  元/平方米
　　办公楼  500
　　一万级（生物洁净室）：2200
　　十万级（生物洁净室）：1900
　　层流室（骨髓移植）：4500~7800
　　30万级（食用菌接种室）：小于1200
第三章  设备配置　　1.外置式空气过滤器
　　必备　9000元/台，定做，作用：对外界新风进行过滤后送入接种室，对室内含杂菌较多的空气进行稀释和补充接种室内氧气。
　　性能参数：
　　风量：1000~1500立方每小时
　　过滤效率：（小于等于0.5微米）99.99%  三级过滤（粗、中、高效过滤器），过滤后空气通过PVC管道通入接种室，室内根据接种台分布情况，将出风口安置于正对接种操作部位，，使吹出的新风直吹或覆盖接种外，保持局部的高洁净度，出风口可采用散流器或自制出风口（在PVC封头上进行均匀打孔），关于出风口吊装位置可以有垂直和水平两种安装方法（垂直即出风口吹出的风向与接种台平面垂直，水平相反），我个人认为水平出风要更好些，因为人在接种时，人手、棉塞、菌种、袋口都在上风位，垂直吹出的风易将其上粘附的杂菌直接吹入菌包内，如是水平流则可减少许多，但在净化远端却更易形成涡流（针对整筐接种）。
　　配置空间：100~150立方
　　阻力：小于250帕
　　2.臭氧机　必备
　　参考价（10~12克每小时）2500~3000元每台。自制价1500元。（需选购电源、发生片最好是防潮型的，箱体，冷却风扇等要高级的话还要时间继电器或时控开关，二极管等等）。
　　臭气灭菌的好处就不作多说了，自己去百度，就灭菌的实际效果而言，我认为要远远强于目前所用的含氯及其它的化学药剂（烟雾剂时代即将成为历史），重要的是它效果的确不错，使用方便，快速，分解快，对人体危害小，且不污染环境，可谓高效，廉价又环保。接种室必备。用于对接种室的带包空间消毒。
　　臭氧发生量的选择：根据净化级别和空间大小而定
　　百级：20ppm
　　一万级：15ppm
　　十万级：10ppm
　　三十万级：7ppm
　　臭氧需求量按以下公式自己计算：
　　W＝C*V/（1-S）
　　W：需要的臭氧量  克/小时
　　C：需要的臭氧浓度  毫克每立方
　　V：接种室体积  立方米
　　S：臭气工作一小时后的自然衰减率，取0.61
　　1ppm=1.96mg/m3
　　建议按百级标准定购，反正增加不了多少投资，且臭氧机的发生量会随着工作时间的延长减少，买个保险，放心。
　　3.自净器  选配  参考价800~1500元每台
　　对接种室内空气进行循环过滤，滤除室内空气中的杂菌粒子，也可根据需要装配成垂直或水平流的局部净化设备。
　　技术参数：
　　①、净化效率：大于等于99.95%，针对0.5微米尘粒而言
　　②、功率：300~600W
　　③、电源：220V
　　④、风量：800~1500立方米每小时误差20%
　　⑤、风速：0.3~0.6米每秒
　　⑥、滤材：（高效）超细玻璃纤维
　　⑦、过滤级数：二级，粗效，高效（或亚高效）两级过滤
　　选配台数
　　①、根据接种室大小选择。
　例设计接种室为50平方，层高3米，要求每小能进行不少于10次的循环过滤，选用风量为1000立方每小时风量的自净器，则需自净器台数为：50*3*10/（1000*0.8）＝1.87,即至少需要两台自净器。
　　②、根据操作台数量选择即每个操作台配置自净器一台，使经过滤后的空气覆盖接种区域，局部洁净度不高于一万级。
　　4.电子净化机　选配  参考价4000元每台
　　原理：第一段为电离段，使微粒带电，第二段为集尘段，使带电微粒沉积在电极板上。在电离段，放电线上加有8100V的直流正电压，与接地电极之间形成具有很强电位差的不均匀电场。放电线周围产生电晕放电，使流过的空气电离，产生大量正离子和电子。电子移向放电线，正离子则附着在空气中的微粒上，使中性微粒带正电，然后注向集尘段。在集尘段，正、负电极板交替排列。电极板之间有均匀电场。当带正电荷的微粒进入电场后，受库仑力的作用，改变流向，流向并附着在负极板上。
　　电子式集尘器可以过滤掉10μm以下的大部分颗粒，具有空气阻力低、积尘后阻力变化小且集尘范围广。电子式集尘器过滤效率取决于电场强度、尘粒大小、气流速度等因素。
　　①、电子式集尘器由电离丝（区）和集尘板（区）组成。电离丝通电产生电晕放电现象（正电压），空气经过电离区时被电离。
　　②、集尘区由多组平行的高电压极板和接地极板组成，空气中被电离的颗粒经过集尘区时，大部分被接地极板吸附。
　　杂菌被电离后吸附，通过高压进行杀死，主要特点是效率高，阻力小。
　　选配方法同自净器。
　　5.制冷系统　必备　参考价不详
　　为避免空气的过于流动给接种造成污染，接种室制冷系统宜采用排管式蒸发器进行自然对流冷却。当然在能保证接种室内洁净度在一万级或十万级的情况下，普通的风冷式蒸发器也可，同时也可采用洁净室专用的洁净空调机组（较贵）。建议采用排管式蒸发器，方案如下：
　　①、土法：采用地下水作冷却介质，使用无缝钢管或暖气片作冷却蒸发器，投资省，但控温有限。
　　②、如采用氨制冷，可用无缝钢管制作成排管蒸发器通入液氨。效果好，制冷快，可利用已有设备。
　　③、如采用其它压缩机组制冷的，将风冷式蒸发器改为排管式蒸发器。工质充注量相应增加，其它改动请教专业人员。
不管采用哪种方案都必须做好防水工作，可在蒸发器下安装接水盘，具体不述。
　　6.无菌工作服　选配　参考价60元每套
　　三十万级接种室的宜选用分体式或大褂式无菌工作服，也可配用连体式，但穿作等较为麻烦。无菌工作服要求能阻留人体脱落物，质地应光滑，不产生静电，不脱落纤维和颗粒物。材质一般采用：超细涤纶长丝＋导电纤维。
　　建议不要使用普通的棉大褂代替无菌工作服
　　原因是：棉质材料本身会发尘，掉毛屑；其次透气性效果好，同时就会造成人体内的灰尘和纤维同过棉质衣服散发出去。这样就会影响接种室内的空气洁净度。
　　7.净手器   选配  参考价400元每台。手部消毒。
　　8.干手器   选配  参考价100元每台。烘干手用。
　　9.其它（略）
　　门的设计。建议使用移动拉门。
　　人员带菌是接种室的最大污染源，有条件的建议在缓冲间装配风淋器或自净器，工作人员更衣后停留一定时间，对缓冲间里的空气进行净化后再进入接种室，这样由外界带入缓冲间再带入接种室的杂菌就会减少很多。
　　接种室洁净度的保持最重要的还是要靠管理。
接种操作规程　　1.杂菌无处不在，接种是一个严格无菌操作的过程，是一个与杂菌作斗争的过程，所有接种操作人员都必须要竖立严格的无菌操作意识，按规程要求进行接种作业。
　　2.熟练的接种操作技术对接种成功率有着直接影响，所有操作人员都必须尽力提高自己的接种操作技术水平。
　　3.接种室开放式接种的接种量对接种成功率有着较大的影响，接种量大，菌种覆盖均匀成品率相对较高，接种人员不得贪图简便少接或接入不均。
　　4.接种室是一个与外界环境相对隔离的区域，人员要同进同出，尽量减少与外界空气的交换。
　　5.进入缓冲间后更换工作服、鞋、帽，戴口罩。在自动净手器下喷洒酒精对双手进行消毒后，一同进入无菌操作间开始接种作业。
　　6.进入无菌操作间应先开启电子净机对空间进行净化作业，人员操作需在净化机无菌区域内进行。
　　7.使用预先配制好的消毒溶液对菌包进行外表消毒，一次性处理完毕待用。消毒时要注意观察菌种有无污染或长势异常。
　　8.使用75%酒精对双手、接种工具进行擦拭消毒，接种工具擦拭后在酒精灯火焰上来回转动灼烧3~4圈，稍冷却。
　　9.将菌种拔除棉花塞，并刨去料面上0.5厘米左右的菌种，然后用接种勺将菌种刨碎（小麦粒大小）即打开菌包接入菌种。菌种必须用完一袋处理一袋，每袋菌种使用完毕后接种工具和手都必须重新消毒一次。
　　10.每袋菌包接入菌种三勺，大约25克。菌包接种孔必须接入菌种，如接种孔有堵塞的可用接种勺向下捅入。接入料面的菌种一定要注意分布均匀，不均匀的可适当摇动使其均匀。
　　11.接种中，待接种菌包的棉花塞要用右手小指和手掌将其夹住，不得放置于操作台面上。塞回时要在酒精灯火焰上转动一圈后塞入。
　　12.接好一筐种后，端上架子车前套环棉塞要侧向压倒，切忌压倒时棉花塞触碰到料面，棉花在携带杂菌，常压灭菌很难将其杀灭干净，触碰料面易引起菌包污染。
　　13.接种操作要力求快速敏捷，尽量减少开袋后菌包在空间的暴露时间。
　　14.接种时如发现有菌种被污染的要将菌种袋拧紧密封，单独放置，并重新对手和工具进行严格的消毒。
　　15.接种作业完毕后按《接种室使用规程》要求做好清洁工作。
接种室使用规程　　1.接种室分为缓冲间和无菌操作间，均为洁净区域，凡进入此区域者均需遵守本规程。
　　2.接种室控制温度为18~22℃,湿度≤90%。
　　3.无菌操作间无新风过滤系统，操作人员及酒精灯燃烧所需氧气由门缝等处进入，携带杂菌较多，因此与无菌操作间相邻的冷却间、缓冲间、过道都必须保持干净整洁，并定期进行消毒作业。
　　4.无菌操作间及缓冲间每月应进行一次洁净度的检测，检测方法为：将直径9cm的培养皿注入PDA培养基15ml,灭菌冷却凝固好后，在接种时将培养皿打开暴露30min后盖上盖，于30~35℃下倒置培养48h后观察结果。
　　5.缓冲间设计洁净度为30万级，检测结果培养皿平均菌落数应≤15个，无菌操作间设计洁净度为10万级，培养皿平均菌落数应≤10个。
　　6.进入接种室应先在缓冲间更换工作服、穿专用鞋、戴工作帽、口罩，头发应用工作帽帽兜兜住，不得批肩或散落。
　　7.进入接种室严禁随便走动、打闹、高声谈笑，不接听和拨打电话，接种操作时动作要轻柔、快捷。工作服、鞋、帽要勤洗勤换。
　　8.无菌操作间使用臭氧消毒，消毒前注意将两端的门关闭严实，当菌种、菌包、药品物件等准备妥当后即可开启臭氧机，消毒人员在开启臭氧机后一定要嗅到臭氧腥味并确定臭氧机正常工作后方可离开，每批次消毒时间为2小时，间隔40~60分钟后可进入接种室进行接种作业，最长间隔时间不可超过1.5小时。
　　9.无菌操作间的洁净度会随着作业时间的延长而降低，接种操作应尽量快速敏捷，一次接种时间不宜超过两小时。
　　10.机器设备是无菌操作间赖以存在的基础，必须定期的进行维护保养，确保机器有效平稳运行。臭氧机滤网每月清洗一次，电子净化机过滤网、电场每月清洗一次，活性炭网每年更换一次。
　　11.接种室要同进同出，进出时动作要迅速，进入后马上将门关闭，不可长时间将门打开，致使外界带菌空气过多的进入。接种期间严禁人员进出。
　　12.接种室两天以上未使用，再次使用前应进行一次密闭空间消毒。保持接种室清洁，接种人员不得将与生产无关的物品带入接种室。
　　13.接种室配备的消毒液浓度为：酒精70%~75%，甲酚5%，新洁尔灭0.1%~0.2%及按规定配备的其它消毒剂。
　　14.接种室每批次操作完毕后都必须做好清洁，地板、角落及轨道槽内料渣要打扫干净，无菌操作台及墙壁应用抹布醮取消毒水擦洗干净。地板用消毒水进行拖洗，拖洗后地板上的明水要用吸水拖把吸干。
　　15.接种室扫帚、拖把、抹布等专室专用，每日扫除的垃圾要及时清走。
　　16.无菌操作间冷却盘管防水槽每月至少冲洗一次，以防灰尘、杂菌聚积，带来污染隐患。接种室门、玻璃每半月必须擦洗一次。
电子净化机维护保养规程　　1.电子净化机随着工作时间的延长，集尘板、过滤网会吸附和聚积微尘、细菌，影响净化、杀菌效果，为保证电子净化机有效平稳运行，应每月进行维护保养。
　　2.过滤网维护
　　2.1  拧动盖板螺丝，将净化机盖板打开，抽出过滤网。
　　2.2  用清水或清洁剂水将过滤网浸泡15分钟，然后冲洗干净并晾干装回原处。
　　2.3  清洗工作每月进行一次。
　　3.电场维护
　　3.1  打开净化机盖板，拨开挡片，按箭头方向取出电场。
　　3.2  在大塑料桶内放入适量水和清洁剂，将电场浸入水中浸泡15分钟，然后用双手托住电场在水中来回摇动，使聚积在电场上的脏物彻底掉落，不可用刷子或抹布擦洗。
　　3.3  电场洗净后取出，然后用清水进行冲洗，直至目丝、集尘板上无清洁剂痕迹残留。
　　3.4  清洗冲净后的电场要站立放置，在阴凉处自然风干，不可在太阳下曝晒。
　　3.5  检查目丝是否破损或弯曲、断裂，如有更换目丝。
　　3.6  使用欧姆表检测双高压接点与电场外壳的绝缘是否良好，如有短路现象应及时排除。
　　3.7  检查完好后，装回原处，盖上盖板即可。
　　3.8  电场每月清洗一次。
　　4.活性炭网的维护
　　4.1  取下电场盖板，将活性炭网抽出。
　　4.2  换上新的活性炭网，盖上盖板即可。
　　4.3  活性炭网根据使用情况，每年至少更换一次。
接种室消毒方法　　1.接种室每日分两批进行接种，每批接种六车，人员定编为八人。
　　2.消毒前需先将已挑选好的菌种搬入接种室，准备好接种必须的工具、药品。
　　3.合上臭氧消毒器电源，用遥控器将其开启，闻到有臭氧腥臭味后人员方可离开。
　　4.遥控器使用方法：按下“开/关”键，臭氧发生器发出“嘟”的一声，出风口有带臭氧味气体吹出，出风口内有两块电板显现蓝紫色光芒并发出“吱吱”声为正常开启。
　　5.遥控器程序已预先设定好，在非正常情况下不得随便按动其它键。
　　6.如在使用遥控器时，按下“开/关”键，臭氧机不工作，可按下“制热”或“制冷”键。其它设定键请不要随便按动。
　　7.臭氧机消毒时间为两小时，消毒时间到后请在缓冲间直接将臭氧机电源切断即可。
　　8.臭氧机接种室两台，缓冲间一台，开启时每台都必须依次开启，只有确认臭氧机正常工作后方可离开。
　　9.消毒人员进出缓冲间进行消毒作业进出必须将门关严，关闭臭氧机时，进出要迅速，尽量避免内外空气的大量交换。
　　培养皿制作新法
　　培养皿用培养基可与制作试管所用的培养基一起制作，不必使用专门的细菌培养基，分装后用报纸包装好，直接入锅灭菌，灭菌完冷却至凝固好后取出，要使用时拆开报纸即可。
　　一般直径90MM，每皿装量20ML
　　作者：ccaxw　来源：中国食用菌论坛