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组培生产常见问题及培养基配置

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发表于 2024-1-7 18:26:17 | 显示全部楼层 |阅读模式
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玻璃化及防治






组培苗的玻璃化

在进行植物组织培养时,经常会发现试管苗生长异常,表现为试管苗叶、嫩梢呈水晶透明或半透时,水浸状;整株矮小肿胀、失绿;叶片皱缩成纵向卷曲、脆弱易碎;叶表缺少角质层蜡质,没有功能性气孔,不具有栅栏组织,仅有海绵组织。这种试管苗生长异常现象就是 “玻璃化”(Vitrification),是植物组织培养过程中所特有的一种生理失调或生理病变。玻璃苗中因其体内含水量高,干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和森质素含量低、角质层、栅栏组织等发育不全,表现为光合能力和酶活性降低,组织畸形,器官功能不全,分化能力降低,所以很难继续用作继代培养和扩大繁殖的材料;生根困难,移栽后也很难成活。






植物微体快速繁殖时玻璃苗的出现已成为一种很普遍的现象,该苗有时多达50%以上,严重影响繁殖率的提高,已成为茎尖脱毒、工厂化育苗和材料保存等方面的严重障碍,造成人、财、物的极大浪费,所以试管苗下班化现象对植物组织培养的危害是相当严重的,也是亟待解决的问题。



导致玻璃化的主要因素:

1.材料差异,在不同的种类、品种间,组培苗的玻璃化程度有所差异。

2.激素水平过高,若细胞分裂素浓度过高或细胞分裂素与生长素相对含量高,易引起玻璃化现象。

3.培养基水势,培养基中离子种类,比例不适。

4.环境温度、光照强度和通气性。温度过低或过高,光照时间强度不足及培养容器中空气湿度过高,透气性较差所造成的通气不良,易造成组培苗含水量高,从而发生玻璃化现象。

5.琼脂浓度降低、有杂质等。






常用的防治措施有:

1.增加光照强度和光照时数。

2.降低细胞分裂素含量。在培养基中添加少量聚乙烯醇、脱落酸等物质,能够在一定程度上减轻玻璃化的现象发生。

3.增大培养基中琼脂的含量,以降低培养基的水势。

4.降低NH4+浓度,减少培养基中含氮化合物的用量。

5.增加容器通风,最好进行 CO2施肥,这对减轻组培苗玻璃化的现象有明显的作用;降低培养温度,进行变温培养,有助于减轻组培苗玻璃化的现象发生。



组培苗的黄化及防治



组培苗的黄化

黄化是指在组培过程中由于培养基成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的幼苗整株失绿,全部或部分叶片黄化、斑驳。这一现象在植物组织培养中比较常见,特别在部分木本植物、花卉中较为常见。






影响组培苗黄化的因素

1、培养基中Fe的含量不足, 各矿质营养不均衡;

2、培养环境通气不良,瓶内乙烯含量升高;

3、激素配比不当;

4、PH值变化过大;

5、糖用量不足或长时间不转移糖已耗尽;

6、培养温度不适;光照不足等。






防治组培苗黄化的方法

1、首先在配制母液和培养基的制作过程中,要检查仪器设备是否准确,还要认真细致地核对每项称量的每一个环节;

2、使用透气的封口膜以改善瓶内通气状况;

3、适当调节pH值、激素配比和无机盐浓度;

4、配制培养基时切记不要忘记加糖,及时转接培养物;

5、控制培养室内的温度,适当增加光照;

6、在培养基中添加抗生素类物质如青霉素、链霉素、头孢霉素等,有时也会出现幼苗黄化现象,应适当减少用量或停止使用。









组培苗的褐变及防治



组培苗的褐变

很多种类的植物体中含有大量多酚类化合物,切取芽时的创伤会激活组织中的多酚氧化酶,将多酚类物质氧化为棕褐色的醌类物质,使外植体的切口处发生褐变,产生可见的茶色、褐色或黑色,此即谓“酚污染”。醌类物质会渗透到培养基中,使培养基褐化,其结果是严重影响培养物的生长和分化,甚至造成培养物死亡。在木本植物,尤其是热带木本植物及少量草本植物中,此现象较为严重。






影响褐变的因素

植物的种类褐基因型、外植体的来源和生理状况以及培养基的成分都会不同程度的影响褐变的程度。一般木本植物的外植体比较容易产生褐变现象,在成年树尤其严重。培养基中含酚过高会导致褐变,含过高浓度的无机盐和肌醇也会加剧外植体的褐变。6-苄氨基嘌呤(6-BA)和激动素(KT)也有诱导褐变的作用。强光和高温同样会促进褐变现象。






防治褐变的方法

1、在培养基中加入抗氧化剂是防止褐变的有效措施。

常用的抗氧化剂有抗坏血酸(VC)、柠檬酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等,该类药剂一般需用浓度为50-200mg/L。

具体方法如下:

(1)用经过滤灭菌的抗氧化剂溶液洗涤刚切割的外植体伤口表面;

(2)将抗氧化剂加入固体培养基的表层;

(3)将刚切割的外植体浸入其中一定时间,

(4)或者在抗氧化剂溶液中切割和剥离外植体。

(5)必要时还可以将几种抗氧化剂结合使用。






2、在培养基中加入活性炭,吸附对生长有抑制作用的褐色醌类物质。

一般认为,活性碳主要吸附非极性物质及色素大分子,可以减少一些有害物质的影响,但是具体吸附的选择性很差,温度低时吸附力增强,温度高时吸附力减弱,甚至会解吸附。通常活性炭的使用浓度为0.5-10g/L。大量活性炭的加入会削弱琼脂的凝固能力,因此要多加些琼脂;很细的活性炭容易沉淀,因此通常在琼脂将要凝固时,需轻轻摇动培养瓶;应当注意的是:活性炭也能吸附培养基中的激素类物质,影响茎尖的分化和生长,因此在使用活性炭的场合,需要适当提高培养基中激素的浓度。






3、不断地(每隔1~2d)将培养物转移到新鲜的培养基上,以摆脱老培养基中褐色物质的不利影响。在使用液体培养基的情况下,这种方法相当有效。



4、为了防止外植体的褐变,需要选取酚类化合物含量较低的实验材料,选择无机盐含量较低,不加肌醇的培养基,并在较弱的光线或黑暗的条件中进行培养。






5、易发生褐变的植物在进行组织培养时,先进行预培养(即培养在基础培养基中)2-3天(如果分泌物多,如利用花魔芋的球茎进行组织培养时,适当延长预培养时间并多次更换培养基),再培养到添加了激素的培养基上。



组培常遇见的问题



两次培养基用的配方都一样,为什么一个凝固的特好,一个就凝固不了?

培养基的凝固与否无外乎有下列几种情况:

1、琼脂批次有变,没有做批次试验,沿用以前的用量造成不足。

2、大量元素重复加入,或大量元素母液配制时出错。

3、pH值调的过低,或有活性炭高压灭菌时间过长,造成蔗糖分解量剧增,影响培养基的pH值降低较多。

4、加入新的天然附加物,或附加物过多。



75%的酒精和70%的酒精有什么区别,组培时用哪种好?

酒精的70%和75%都是可以的,但往往由于桶装酒精的浓度达不到95%,这样按照70%的配制就达不到要求了,因此我们一般是桶装按照75%的配,瓶装则按照70%的配。



大型灭菌器在灭菌的时候总会出现个别瓶子破裂的现象,请问什么原因?是温度过高,压力过大,还是内部冷热不均造成的呢?

高压灭菌造成玻璃瓶的破裂,特别是大型灭菌装置,最主要还是在放气冷却时造成的。究其原因,应该是在放气时,由于容积较大,压力在不同位置(内外部)的变化速度并不相同,致使瓶内与瓶外的压力差距较大,如果是封口膜,表现的可能就是塑料膜的破裂。



初代培养时,外植体出现发白,慢慢枯死,是什么原因?

外植体的初代培养出现这种情况,是比较好理解的。大田植物材料离体以后,进入不同环境中继续生存代谢,需要一个过渡。

首先,植物材料要吸收培养基的养分,不再是根吸收,盐类浓度相对于离体的植物材料的吸收能力可能是过量的,植物材料褪色就是叶绿素形成受阻和细胞代谢受阻,另外培养基养分供应的有效性滞后,以及植物材料本身内含物向培养基的流失等等。建议在初代培养阶段最好先采用空白培养。






做无毒苗的快繁,一直找不到合适的培养基,能不能帮我推荐一种?

关于组培快繁的方式概括起来有下列两种途径:

1、外植体-愈伤组织-再生芽-继代-生根-出苗

2、外植体-丛生芽-继代-生根-出苗

至于采取那种途径,需要彻底了解所选组培植物的生物习性,包括繁殖方式,顶端优势,萌孽生根能力等。



一般情况下KT的母液应该配成多大浓度?IAA能高压灭菌吗?高压灭菌成分会变吗?

KT一般配成0.05-0.1ppm。IAA极不耐高压灭菌,一般采用过滤灭菌。如果利用高压灭菌其分解率会在85%以上,致使其作用不明显。



请问植物病毒检测的简便方法?

由于经过脱毒处理,即使未完成脱除病毒的植株,其体内病毒的含量也会较低,常常在最初的一、二次病毒检测中呈阴性,因此有人建议在前18个月内,必须对植株进行若干次检测。目前常用的植物病毒检测方法有可见症状鉴定、寄生鉴别、抗血清检测、电镜检测、分子检测等。



可见症状鉴定法较简单,但准确性差,对于不表现可见症状的隐症病毒几乎无效;而电镜检测、分子检测虽然检测准确率高,但设备昂贵,尤其电镜不可能每个组培室都配备,故未在生产上广泛运用;目前生产上,国内外仍主要采用鉴别寄主的酶联免疫检测法检测植物病毒。






组培苗生长环境有何特点?如何针对这些特点提高移栽成活率?

组培苗炼苗是组培过程中较为重要的一个环节,是一个较为复杂的技术体系,提高炼苗成活率是决定组培成败和降低组培成本的关键。



试管苗一般在高湿(100%)、弱光(3000-4000Lux)、恒温(25℃)下培养,生长的植株有以下几个特点:(1)、叶片无保护组织(角质层、蜡质、表皮毛等),加之细胞间隙大,气孔开张大,因此水分散失较快,易于萎蔫。(2)、根无根毛或极少,并且有些从愈伤组织上发育的根与芽的疏导组织不相同,因此吸水能力较弱。而当炼苗移栽时,环境有了极大的改变:湿度降低、光照增强、温度升高、温差变大。



具有以上特点的组培苗,在此环境下,叶片失水较严重,根系吸水能力不足,即吸水量小于蒸腾水量,从而造成植物萎蔫,炼苗失败。另一种情况是,空气温度上升要比基质温度上升快,而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的,当气温升高时,加之湿度较低,叶片蒸腾急速增加,此时基质温度上不去,根系吸水能力不够,造成蒸腾大于吸水的失衡状态,从而萎蔫死亡。



要想获得高的炼苗成活率就得针对以上问题,一方面提高出瓶苗的质量,提高其抗逆性,生根前的壮苗、理想的生根配方和生根培养环境的调控是关键;另一方面就得有针对组培苗特点创造一个适宜的炼苗环境,比如保证空气湿度,平衡空气和基质的温度平衡关系等。






有些植物在组培生根阶段会把大量元素和糖减半,根据什么来判断是否需要减半?

在组培过程中,我们提起配方往往只局限于激素的配比和添加物的使用,其实对基本培养基的构成和培养条件(温度、光照、湿度、PH等)都属于配方的范畴。在这方面的调整主要是根据实际培养状况灵活调整。在生根阶段,试验证明培养基高渗透势或液体培养基有利于营养素和激素的运转,有利于根的发生和形成,因此大部分植物在生根过程需要调整基本培养基的组成。但具体需不需要应该通过对比试验确定。



什么是滤纸桥生根?

滤纸桥生根技术是分化苗直接瓶外生根技术,其作用主要是简化生根环节,提高炼苗成活率,降低组培成本,同时还可以对污染苗进行最大程度的利用。



人工种芽的形成标志是什么,怎样才能算是一个完整的人工种芽?

一个完整的人工种子是由体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三部分组成。

它的优势在于:

1、培养条件可以人为控制,省地省工,可直接播种。

2、人工种子制作时,可加入营养物质、植物生长调节剂、固氮菌、杀虫剂等。

3、以用于生产人工种子的体细胞胚,可以利用生物反应器大规模生产,效率极高。

4、一些珍贵种苗或树种可以通过人工种子,加速其生产应用。



存在问题:

1、并非所有植物都能培育出大量高质量的体细胞胚。

2、目前的人工胚乳和种皮还不够理想,不能有效防止微生物的腐蚀。

3、人工种子的贮藏问题有待于进一步完善。






在组培中胚状体在外部形态上是如何与愈伤组织区别的?

大量实验证实,植物体细胞具有成胚的潜力,由体细胞形成的胚状体叫体细胞胚。一般情况,体细胞组织形成愈伤组织之后3周内,在愈伤组织上出现大量胚,这些胚是由愈伤组织外层细胞以及深部细胞起源的。在离体或活体条件下,体细胞经原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷胚期和子叶期等阶段形成的胚叫体细胞胚状体。从外植体或愈伤组织表面产生胚状体的情况较为常见。



从愈伤组织向球形胚过渡的标志是细胞的活跃分裂形成一团致密的没有表皮层的细胞团结构,可以明显地与疏松的愈伤组织区分开。



鉴别胚状体的标准:

1、胚状体具有极性,也就是说胚状体在发育的早期阶段,在其相反的两端分化,分别出现茎端和根端,是一种单极性结构。

2、在组织学上,胚状体的维管组织与母体植物或外植体的维管组织一般没有联系,

其维管组织的分布呈“Y”字形。而根或芽的分化,里面长出原形成层束,与愈伤组织形成的或外植体中的维管组织往往相连。






如果在配制母液时,将大量元素和微量元素参在同一个罐子内,会对植物有影响吗?

母液配制,主要是考虑到母液稳定性问题,根据化学反应原理,浓度很高的大量元素中的阴离子,对微量元素的金属离子来说是过量的,因此若混在一起,微量元素中的金属离子会很容易发生水解反应,生成沉淀,从而失效。长时间使用这样的母液,就会发生生理病害,比如缺素症(黄叶,叶不展,萎缩变脆等)。建议使用干粉式培养基。



植物组织培养的培养基为什么只用蔗糖而不用葡萄糖?为什么动物培养的培养液中用葡萄糖而不用蔗糖?

这个问题应该从植物与动物的生理机制去思考。植物与动物的最大差别就是植物是自养型的(光合作用),而动物是异养型的(外部吸收代谢)。植物光合产物是多糖(二碳糖以上,包括蔗糖),贮藏产物形式是淀粉,而淀粉的合成前体就是蔗糖。蔗糖=葡萄糖+果糖,所以蔗糖的合成必须同时要有葡萄糖和果糖,其实植物也只能吸收葡萄糖和果糖。



在组织培养中加入蔗糖,经熬煮和高压灭菌后就会分解成植物能够吸收的葡萄糖和果糖形式。其实这样看来在组培中,植物也有部分异养的特点,如果在培养基中缺少任何一种糖的形式,植物在自养能力(光合,呼吸,产物代谢等)较差的情况下,就难免会影响其生理代谢。与植物不同的,动物是异养型的他不需要淀粉的积累,也没光合作用,动物细胞本身所处的生理环境和代谢方式就决定了它对糖形式的要求了。






如何利用组培技术培养一棵未知植物?

作为未知植物的组培,应该归为珍稀植物材料的范畴。一是数量有限,二是不曾命名,三是无文献可查。这种材料如果性状优良,进行组培快繁是相当必要的。一般可以通过以下步骤开展工作:

1、植物的生物学性状,进行植物归类和属种划分。

2、确定植物的繁殖方式(分蘖、种子、扦插、根茎等),比较组培繁殖的优势。

3、根据植物特性(顶端优势,萌蘖能力等)确定组培发生方式。

4、小量无菌外植体系的建立,确定高效外植体获得方法。

5、大量外植体群体建立,诱导分化配方设计。

6、确定最好分化的继代配方。

7、生根配方设计与确定。

8、试管苗出苗。

9、大田栽植,观察组培苗生物学性状,与母本比较鉴别,确定优良性状的遗传稳定性。

10、工厂化繁殖,市场化运作。



在初代培养阶段,成功地诱导出绿色的愈伤组织;进行继代培养时愈伤组织增殖很快,却始终没有出芽,如何解决不产生不定芽的问题?

愈伤组织诱导成功后,如何有效地诱导出不定芽是相当重要的。外植体产生愈伤组织的时间和愈伤生长的程度,随不同植物种类和培养条件有较大的差异。有些植物形成不定芽比较容易,能够直接从外植体受伤的或没有受伤的部位分化出不定芽。



一般认为细胞分裂素/生长素的比值是控制器官发生的重要因素,调整他们的适当比值就可以有效的控制愈伤组织的芽、根等器官的分化。在此理论下,愈伤组织诱导不定芽的能力,与愈伤组织的状态密切相关,能够诱导形成分生细胞团至关重要,分生细胞排列较为规律,较大的在外,越向内细胞越小,排列也越紧密,细胞质浓厚,核相对较大,这样的分生细胞在激素比值调控的情况下,就很容易形成不定芽。这也就是为什么愈伤组织在继代的时候要交替使用不同激素的原因。



NAA和2,4-D哪个生长素促进愈伤诱导效果更好?

对于愈伤诱导和增殖来说,2,4-D效果要比NAA明显;但有一个问题,很多情况下,2,4-D诱导的愈伤比较难以再生芽。






灭完菌,凝固好的培养基上面会有一层水是什么原因?如果将植物材料转接于这样的培养基中,会有什么后果?

培养基灭过菌后或多或少会有积水现象,一般来说冬天要轻一些。如果积水太多接种的时候倒出来,不然容易造成容器壁水珠比较多,影响光照,从而造成玻璃化现象加重。



在组培中,叶片较易脱落,是什么原因引起的呢?

叶片脱落是对逆境的一种表现,温度过高、透气不良、培养物过于密集、久不转移、有害气体积累(乙烯、氨气、甲醛)等会引起植物材料的落叶或黄化。



空白培养是什么意思?

空白培养在高效外植体系的建立方面是很有用的步骤。空白培养就是不加任何激素的培养过程。对于外植体迅速适应瓶内环境和有效外植体群体的建立是很有用的。



如果芽体只是长高,不膨大也不分化,有的静止不动,请问这会是什么原因引起的呢?

成活外植体如何成功启动是组培过程中至关重要的环节之一。由于大田植物材料其激素水平和细胞活性差距较大,如何迅速将外植体对培养基条件做出反应也有很多方法,首先芽体萌发时应用赤霉素,黑暗培养,高低激素配合使用等都会起到很好的效果。



用幼芽启动用于分化芽的愈伤,NAA与6-BA的比例有一般规律吗?还有用2,4-D启动的愈伤再转到只含NAA和6-BA的培养基中,愈伤变为绿色,有分化的可能吗?

离体的愈伤组织是一种正在增生的非组织化的细胞群,可以从几乎任何类型的植株获得。由外植体形成愈伤组织很少是自发的,它代表创伤反应的扩展,一般要求在培养基中有生长素,常常还要求有细胞分裂素同时存在。最有效地产生愈伤组织的激素浓度随所用的植物及器官而异,但其比外植体直接诱导苗所需的浓度要高。



大多数植物中愈伤组织可从外植体上分离开,并可进行继代培养和连续繁殖,所使用的培养基中所含的激素水平,与用于诱导愈伤组织时相同。如果降低激素水平,或适当调节生长素对细胞分裂素的比例,某些愈伤组织将再生出苗或胚。






洋葱也能加在培养基中?能说说它的机理吗?

培养基中添加有机附加物,如马铃薯、香蕉、椰汁等,主要是由于他们含有丰富的糖、蛋白质、各种无机盐、维生素以及各种活性物质。洋葱也不例外,除了含有丰富的营养物质之外,洋葱还含有丰富的硫化合物,是强有力的抗菌成分,能杀死多种细菌。



在壮苗生根培养基中培养,会有黄叶出现,叶子都枯了。是什么原因引起的?

组培苗的黄化是由培养基成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的,但这样的解释是比较抽象的。我觉得在壮苗生根阶段,由于培养基的变化,特别是激素的改变导致培养基高压灭菌后PH变化与分化阶段是有较大差别的,加之苗子与培养基接触面积的变小,营养供应滞后。所以当根长出来以后,会有不同程度的改变。如果解决的话,还应该确定一下生根培养基高压灭菌后的pH变化,进行适当调整,同时在分化时进行适当壮苗调整也是比较好的方法。



1、接种前,接种工具要浸泡在酒精中,所使用的酒精浓度是75%还是95%?

2、用新铁炮百合鳞片作外植体,对鳞片切割有没有什么方法可以减少污染,书上讲根据极性方向接种到培养基上,怎么判断极性呢?

3、使用玻璃瓶和不锈钢的盖子作为培养容器,透气性是不是不好,会影响培养效果吗?

接种工具接种灼烧前浸泡酒精的浓度,可以是75%也可以是95%的。至于极性指的就是植物材料有趋向发育的特征。比如是茎繁,靠近茎顶端发出芽子,远离茎顶端会长出根。是根繁的话,新芽发生于近心端,新根发生于远心端。因此在接种时,尽量不要使材料倒置,尽量保持植物的极性方位,不能将茎端插入培养基内。培养容器的透气性是决定瓶内湿度和气体状况的主要因素,因此如果过于密封,使瓶内外得不到气体交换,就会不同程度的受到影响。建议使用透气性好的培养容器。





生化培养箱可以进行植物组织培养吗?它与光照培养箱有什么不同?

光照培养箱主要是模拟植物的光照条件,更适合植物的培养、种子发芽等的实验,而生化培养箱更偏重于温度、湿度的控制,微生物实验等比较合适。



高压灭菌后培养基的pH会变大还是变小?MS和1/2MS哪种培养基pH变化更大?

培养基灭菌后pH会降低0.2左右,其主要原因就是有机物的分解,特别是维生素、氨基酸和糖,因此MS会比1/2MS培养基pH变化更大。



内生菌造成的污染在外观上怎么辨别?

内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的细菌,可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接产生扩增出微生物DNA的方法来证明其内生。在植物组织培养中,由于材料内部的内生细菌不能被一般的表面消毒方法所清除,随着材料带入培养过程,从而引起的污染称为内生细菌污染。从污染状态来看,是发生于植物材料周围,一般会由培养基内向外延展,并且发生的时间也会比接触性污染要长,接触性的细菌一般在2-4天表现,内生菌则会超过4天,并且菌的种类也相对单一。



水解酪蛋白有酸水解,有酶水解,在使用过程中有没有区别,他们的在培养基中的作用是一样的吗?

水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)是多种氨基酸的混合物,对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用,通常用量在500mg/L,特别是当有高水平IAA存在时更是如此。对于酪蛋白不管是酸解还是酶解,作用都是一样的,但考虑到组培苗的异养功能,酸解应该更有利于发挥其作用。





有些树种受伤后会分泌出一些白色的浆液,比如梓叶槭,不管是茎段还是叶片,只要有伤口的地方都会有浆液,而这会加重外植体的褐化,请问应该怎么处理呢?

这是植物的伤流现象。由于伤流液中含有酚类物质,因此在培养中极易引起褐变。许多研究表明,选择适当的外植体和培养条件是克服褐变的最主要手段。通常外植体应有较强的分生能力,在最适宜的细胞脱分化和再分化培养条件下,使外植体处于旺盛的生长状态,便可大大减轻褐变。适宜的温度和在全黑暗条件下进行培养也可显著减小外植体的褐变。液体培养和连续转接也是很好的措施。



另外,加入一些氧化剂或用抗氧化剂进行材料(外植体)的预处理或预培养,可大大减轻醌类物质的毒害。这些抗氧化剂包括:VC、柠檬酸、硫代硫酸钠等。此外,0.1%-0.5%活性炭对吸附酚类氧化物的效果也很明显。







组培室常用的培养基及其配置



MS培养基

MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度,能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存和消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此,一般情况下,不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。



B5培养基

与其他培养基相比,它的主要特点是含有较低的铵,而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时,发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上生长得好,有些在B5培养基上生长得更适宜。





N6培养基

为水稻的花药培养设计,成分简单,硝酸铵含量高,不含钼,用于花药(谷物)培养。



White培养基

为培养番茄根尖培养设计,无机盐浓度低,属于低盐培养基。适用于生根培养,成熟胚胎培养,后作了改良,多用于本草植物。





常用培养基母液成分及配置过程



培养基母液的各种成分包括大量元素、微量元素、Fe盐、有机成分、肌醇、激素等。



大量元素母液的配制(10X,1 L)

微量元素母液的配置(100X,0.5 L)

Fe盐母液的配置(100X,0.2 L)

有机成分母液的配置(100X,200ml,无肌醇)

肌醇母液配置(100X,200ml)

激素母液的配置




注意事项



配制大量元素母液时,某些无机成分如Ca2+、SO42-、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应,产生沉淀物。为避免此现象发生,母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用等级较高的分析纯,各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合,混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42-、Mg2+和H2PO4-等离子错开混合,速度宜慢,边搅拌边混合。CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。另外,CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾,操作时要防止其溢出。






使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上,用完以后,用吸耳球将天平内的脏物清理干净。



在配制铁盐时,如果加热搅拌时间过短,会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底,此时若将其冷藏,FeSO4会结晶析。为避免此现象发生,配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合,并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后,再冷藏。



由于维生素母液营养丰富,因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液,有效浓度降低,并且易给后期培养造成伤害,不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素,并贮存在棕色无菌瓶中,或缩短贮藏时间。






所有的母液都应保存好,若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。



计算时,要考虑周全,无论是配置母液时的计算还是配置培养基时吸取量的计算,都要考虑周全,尤其是母液配置时的计算,因为贯穿以后的实验,必须准确制备。




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