母种培养基的配制

春雨菌业

母种培养基的配制

1.     器具

试管 刀 天平 铝锅 棉塞 纱布 漏斗 烧杯 量筒

2.   常用的母种培养基配方

①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g。琼脂20g，水1000ml，{如果需要配制250ml的培养基，那么马铃薯、葡萄糖、琼脂的比例是50:5:5}，也可用蔗糖取代葡萄糖，即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B1 10㎎，即为马铃薯综合培养基。广泛适用于各种食用菌母种的分离，培养和保藏。

②马铃薯玉米粉培养基：马铃薯（去皮）200g，蔗糖20g，玉米粉50g，琼脂20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。本配方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。

③马铃薯黄豆粉培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g，黄豆粉20g，碳酸钙10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。适用于蘑菇、草菇。

④葡萄糖蛋白胨琼脂培养基：葡萄糖20g，蛋白胨20g，琼脂20g，水1000ml。

⑤蛋白胨、酵母、葡萄糖琼脂培养基：蛋白胨2g，酵母膏2g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾1g，葡萄糖20g，维生素B1 20㎎，琼脂20g，水1000ml。

具体步骤

1.     计算。按照选定的培养基配方，计算各种成分的用量。

2.     称量。用天平秤取各种物质，马铃薯去皮去芽眼，削掉青绿部分，对不易称量的成分，可用玻棒和烧杯称重，微量元素等需要量少，难以称准时，可先配成较浓的原液，再从中取出需要的量。

3.     配制。若配制合成培养基，先量取蒸馏水，加入琼脂，加热溶化；再加入称好的其他物质。为避免发生沉淀造成营养损失，加入的顺序一般是先加缓冲剂，再依次加入主要元素、微量元素和维生素等；若各种成分均不发生沉淀，也可一起加入。

4.     煮汁，去滤液。马铃薯切成1㎝见方的小块或2~3㎜厚的薄片，加水约1200ml煮沸，再用文火保持20~30分钟、并适当搅拌，使营养物质充分溶解出来，然后用4层预湿的纱布过滤，取其滤液。

5.     补足水量，加药品溶化。补足水量至1000ml，然后往滤液中加入琼脂，小火加热，搅拌至琼脂完全溶解，再加入葡萄糖和其他营养物质使其溶化后，用PH试纸检测其PH值，可根据需要使用氢氧化钠和盐酸，调整适宜的酸碱度，进行分装。注意开锅搅拌，防止溢出或焦底。

6.     分装试管。制备好的培养基应趁热分装，可用玻璃试管，首先把较大的玻璃漏斗固定在滴定架上，下接一段乳胶管和玻璃管，用弹簧夹夹住胶管。手拿试管，分装量掌握在试管长度的四分之一。注意分装时，培养基不能粘在试管口壁上，否则会污染棉塞。

7.     赛棉塞。注意要松紧适度  8.高压锅灭菌30分钟