母种的分离与保藏

碧野

第一章    母钟的分离与保藏

能否制作出合格的菌种？菌种的保藏条件如何？是评价食用菌生产企业是否“专业”的标准。更为重要的是自繁菌种可以大大降低买种的费用，进而提高经济效益。食用菌菌种的来源一般有两种途径：一是采用组织分离或孢子分离技术自繁；二是从有

关科研部门引种。

第一节食用菌母钟的制作技术

一、制作食用菌母钟的设施要求

（一）   接种设施

1、  无菌接种室

接种室为高度洁净的无菌区，一般长宽各2米左右，高约2.2米。墙顶装紫外线灯和日光灯各一盏。地面光洁有下水道，墙壁用防水涂料或油漆刷白，便于冲洗消毒。接种室外间为缓冲室，其长度与接种室相同，宽1米。缓冲室墙顶也装紫外线灯和日光灯各一盏，壁上有挂衣架。接种室和缓冲室的门均应为推拉门结构。

紫外线灯用于空气消毒，既干净有无污染，是一种很好的消毒方法，因而长期被广泛的采用。紫外线灯管以悬挂吊在顶棚下为宜，一般应安装在离操作台1.5米处。紫外线作用最适温度为26.7摄氏度。在潮湿情况下，效果会降低。紫外线灯一般在最初使用的100小时中很快降低功率，故需在使用100小时候测定其强度（用紫外线光度计测）。如功率下降为原有的70%，就认为失效了，应当即时更换。若不即时更换，不但没有杀菌效力，这个能量还会有利于细菌生长。紫外线灯管的维护极为重要，至少2-4周，甚至每周清洁一次。可用干净软布或酒精湿润过得棉花轻轻擦拭，要避免在玻璃上产生痕迹，禁止用有油或腊的不擦，装卸灯管要避免用手直接接触灯管表面，以防灯管发生石头现象。在使用过程中，操作人员的眼睛和皮肤切不可直接暴露在紫外线灯光照射下，以防受伤害。

接种室的洁净度如何，可用简便方法检验：在接种室的工作台上，以平均间隔位置摆放平皿3个，每个皿内装营养丰富并经灭菌的固体培养基约20毫升。打开皿暴露培养基30分钟再盖上，于37摄氏度培养48小时检查菌落数，平均每个皿中不超过4个为灭菌合格。洁净度基本达到100级（国际标准：空气大于等于0.5微米的尘埃量小于等于3.5粒每升，即达到100级）。

接种室单独使用紫外线照射，而不同时进行无菌通风，是不能达到无菌要求的，其原因是：

（1）       紫外线辐射面积有限，紫外线虽有很强的表面杀菌效果，但有效辐射面积有限，即时在应用合理的情况下，也不能杀死空气中全部细菌。因此，还需要配合使用化学灭菌及空气过滤法，来滤除未被杀死的细菌。

（2）       紫外线穿透力弱，细菌多数依附在灰尘上，而紫外线穿透力较弱，对灰尘上的（特别是较大颗粒）细菌，灭菌效果并不彻底，而无菌通风是移除尘埃必不可少的措施。

（3）       接种室通风不良，接种室为密闭房间，不能自然通风，如果不采用人工通风，则由于人汗及料瓶(袋)水分的蒸发增加了室内的温度和湿度，只是细菌和霉菌繁殖，且不利于操作人员的身体健康。

条件允许时，应安装空气过滤装置，以滤除杂菌灰尘。生物粒子如细菌及真菌孢子的直径大部分在0.5微米左右，因为它们不能独立存在，都寄附在尘埃上面成为一个群体，凝聚直径都大于0.5微米，菇高效空气过滤器在除尘时除了菌。

无菌通风设备一般是由离心鼓风机、装有滤板的风箱和风道组成。理想的通风设备应有加热和冷却空气的装置。无菌空气应子室顶棚中央进入，而由房间的下角风口排出，排风的方向应先过缓冲间，再经过更衣室，标准接种室的气压应保持正压，大约高出室外0.3-0.5大气压，这样就防止了外界不洁净空气的反流。

总之，接种室的空气处理，既不能单靠通风，也不能，单靠紫外线照射，必须二者结合起来才能达到室内空气净化 的目的。

接种室是大批量菌种生产中常用的接种场所，特点是操作方便，接种速度快，但空间消毒效果不如接种箱，而且刺激性气味大。为了提高工作效率，减少污染，接种室应该设在灭菌是和培养室之间，培养基灭菌后直接进入接种室，接种后即可移入培养室。

利用接种室接种时，不能大声喧哗，尽量减少走动，一面空气中承诺粗的杂菌孢子随气流卷入培养基内。接种室和缓冲室应经常保持清洁，使用前，将培养基 等搬入室内消毒接种；使用完毕要及时清理干净。

装有紫外线灯消毒，也可采用药物熏蒸消毒、药液喷雾消毒、擦拭消毒或几种方法配合使用，以提高消毒效果。