乳酸杆菌简介

春雨菌业

乳酸杆菌来源，应用，分离筛选及鉴定等知识汇总
　　乳酸杆菌又称嗜酸乳杆菌，乳酸杆菌是一种"友好"细菌在消化道和阴道的自然存在。据营养师菲利斯答：鲍尔奇营养治疗的"药方"，在一个健康的结肠菌群应包括至少85%的乳酸杆菌和15%，大肠菌群。然而，在今天的糖消费的社会，这些百分比往往逆转。这种情况往往会导致气，腹胀，毒性，便秘和念珠菌增生，这往往会导致酵母菌感染和减少食用吸收的营养。
　　乳酸杆菌的来源
　　乳酸杆菌的凝结，是由细菌从牛奶，天然酸奶产品。新鲜的，不加糖的酸奶是最好的来源，因为它不含有糖，它可以对这些自然文化工作。片剂，胶囊或粉末形式，有效的乳酸杆菌补充剂含有生物体的高数字。鲍尔奇建议选择一个补充，有一个最好的结果，至少有1亿每克计数乳酸菌单一菌株。
　　乳酸杆菌的应用
　　常见的应用包括乳酸杆菌的补充治疗或预防阴道或口腔真菌感染，服用抗生素引起的腹泻治疗，以及用于治疗尿路感染。乳酸杆菌含有抗真菌的特性，有助于降低血液中的胆固醇水平，帮助消化，加强适当的营养吸收。
　　乳酸杆菌的分离筛选及鉴定
　　一、材料与方法：
　　1、菌种：新鲜乳酸饮料(标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)
　　2、试剂： 脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵 母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75% 乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙;0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g、香柏油、脱脂奶 粉100g 、蔗糖10g;
　　3、仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养 箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、 移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线 绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种 针(环)、擦镜纸
　　4、方法：
　　(1)无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养
　　(2)菌落观察与镜检
　　(3)筛选生产用菌株
　　二、实验步骤
　　1、分离
　　(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
　　BCG牛乳培养基配制：
　　A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液 1ml，80℃灭菌20min。(1.6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿 加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成)
　　B溶液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g，PH6.8，121℃湿热灭菌20min。 以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。
　　(2)样品的处理
　　按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样，放入装有90ml无菌 水的三角瓶内，振摇混匀。
　　(3)分离方法
　　①倒培养基
　　在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后，每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基，立即放在桌上摇匀，冷却凝固后即成平板。
　　②十倍稀释法
　　将检样充分摇匀后，用十倍稀释法稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5各种稀释度的样品液。
　　③分离
　　直接用接种环蘸取10-2、10-3两个稀释度的试管中原液，在BCG牛乳培养基琼脂平板上划线分离，每稀释度做两个平皿。置40℃培养箱中培养48h。如出现圆形稍扁平的黄色菌落及周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
　　2、鉴别
　　(1)配制脱脂乳试管培养基，分装试管，包扎，灭菌备用。
　　脱脂乳试管培养基成分：20g脱脂奶粉，285ml灭菌水。
　　配制好的脱脂乳培养基分装到15支试管中。
　　(2)选取经初步鉴定的乳酸菌典型菌落，用接种环挑取转至脱脂乳试管中，40℃培养箱中培养8～24h。若牛乳出现凝固，无汽泡，呈酸性，涂片镜检细胞为杆状或链球状(两种形状的菌种分别选入)，革兰氏染色显阳性，则可将其连续传代4～6次，最终选择出在3～6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。