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桑黄优质菌种的培育制作

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发表于 2021-12-1 21:05:18 | 显示全部楼层 |阅读模式
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  桑黄,是一种多孔菌科、木层孔菌属真菌,是一种名贵中药,一种多年生的药用真菌。现代研究证实桑黄多糖能够缓解疼痛、食欲不振、体重减轻及疲劳倦怠等癌症特有的症状,提高生活品质。然而,在我国境内的优质桑黄菌非常有限,远远供不应求,况且人们对桑黄本身的质量药性追求很高,需要有更高品质的桑黄菌。通过对桑黄菌种的优质培育和栽培技术研究,高品质的桑黄菌能够成功栽培出来,为人所用。

  菌种的优劣直接关系到产品的质量与产量的高低。菌种的质量包括菌株的生物学特性和菌种的纯度两个方面。

  一 菌种分离

  桑黄菌种分离包括菌木分离、组织分离、孢子分离等多种方法,每种方法都可以获得桑黄菌种。一下是野生桑黄组织分离法:

  1.桑黄子实体的处理:取桑黄子实体,用干净刷子刷去表面杂质,再用酒精擦洗外表面进行消毒,放入无菌烧杯中备用。

  2.组织分离:将已经备好的子实体放入到接种箱内,准备好建剖刀、酒精灯、母种斜面培养基、镊子、刀片等工具,一起放入接种箱内,进行杀菌操作,确保整个过程保持在无菌环境下。灭菌结束后,取子实体最好部位菌丝快,转接移入到母种斜面培养基表面,全部操作完成后,即可放入母种发菌区,发菌。

  二 菌种制作

  利用菌种分离出第一代菌丝体,扩大繁殖而成的试管斜面菌种,称为母种(一级种)。母种体积小,易存放。将母种的菌丝体移接到玉米粉等培养基上,经栽培而成的瓶(袋)菌种称为原种(二级种)。用原种扩大繁殖直接用于栽培的菌种,称为栽培种或生产种(三级种)。

  1.母种(一级种)制作

  母种培养基:①马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA):去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克(夏天22-23克,下同),水1 000毫升。②CPDA培养基(甲):马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾(KH2PO4)3克,硫酸镁(MgSO4)1.5克,维生素B1、B2各10毫克,琼脂20克,水1000毫升,③玉米粉培养基:玉米粉50克,琼脂20克,葡萄糖30克,磷酸二氢钾(KH2PO4)1克,硫酸镁0.75克,维生素B1、B2各10毫克,水1 000毫升。

  桑黄母种制作流程:母种培养基选择→配制母种培养基→培养基装管灭菌→冷却→接种→培养→质量检查→桑黄母种。

  2.原种(二级种)制作

  原种培养基:①阔叶硬杂木78%、麦麸20%、糖1%、轻质碳酸钙1%。②杂木屑50%、棉籽壳25%、麦麸20%、玉米粉3%、糖1%、轻质碳酸钙1%。③棉籽壳85%、麦麸10%、玉米粉3%、糖1%、轻质碳酸钙1%。④玉米淀粉50%、棉籽壳30%、麦麸10%、玉米粉7%、过磷酸钙1%、糖1%、轻质碳酸钙1%。⑥甘蔗粉48%、杂木屑30%麦麸15%、豆粉5%、糖1%、轻质碳酸钙1%。

  三 桑黄原种制作流程
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1.原种培养基的配制:选择好最适培养基配方,按配方先将干原料轻轻搅拌混合,再混入水,将干料和水搅拌均匀混合在一起。经验上的分析,含水量可以用手攥紧团撵得方法,攥撵时指缝间似有水滴又不滴水,这时的含水量适宜,搅拌均匀后准备装袋。

  2.原种培养基的制作:搅拌好了以后,用装待机将培养基装入到聚乙烯筒袋里,用扎口机扎好,并且检查是否有破洞,如有用胶带封口。

  3.原种培养基的灭菌:装好后进入灭菌阶段,一般常压半天时间,高压2—3小时就可以将培养基移出到接种室内。

  4.原种菌种的接种:等原种培养基冷却后将接种室内环境灭菌,在无菌环境下将母种菌丝接入到原种培养基内,最后培养原种。

  5.原种菌种的质量检查和储存:每一个原种菌种制作好以后,需要一段时间的发菌观察期,通过质量检查筛选后,保留储存优质桑黄原种菌种。

  四 栽培种(三级种)制作

  1.培养料配方:

  ①食用菌废料50%、棉籽壳30%、麦麸15%、玉米粉3%、石灰1%、轻质碳酸钙1%;

  ②玉米芯50%、棉籽壳30%、麦麸10%、玉米粉8%、石灰1%、轻质碳酸钙1%;

  ③阔叶硬杂木50%、棉籽壳30%、麦麸18%、石灰1%、轻质碳酸钙1%;

  ④杂木屑40%、稻草粉40%、麦麸15%、玉米粉3%、石灰%、轻质碳酸钙1%。

  2.拌料:按灭菌灶容量多少配方比例计算取各种培养料,拌料时先将原料干料拌匀,再将糖溶于水中后拨入,翻拌均匀,无成团结块现象。含水量达到60%—65%左右,切忌原料过湿或太干。用手撰料成团,指缝似滴不滴水为宜,搅拌好后即可用装待机装袋了。

  3.装袋:培养料配制后立即转入装袋工序。菌袋可选用15厘米×35厘米规格或17厘米—33厘米规格的聚丙乙烯或聚乙烯筒袋,一般每袋装料450克左右。规模化生产主要采用装袋机装袋。装袋机每小时可装400-500袋,一台装袋机配7人为一组,其中铲料1人,递袋1人,捆扎袋口4人。男女均可。现可选用全自动装袋机,机器换人可成倍提高效率。

  4.灭菌:灭菌工作做得好坏,直接关系到培养基质量和杂菌污染率,必须注意以下5点:

  ①及时进灶:当培养料拌湿后,酵母、细菌活性增强,加之配料处于气温较高季节,培养料营养丰富,装入袋内容易发热,如未及时转入灭菌,酵母、细菌加速增殖,将基质分解,导致酸败。因此,装料后要立即进灶灭菌。

  ②合理叠袋:量大采用大型罩膜灭菌灶,一次容量3000袋,灶的四角采用井字形,中间采用互连井字形排列,这样就可防止塌棒且蒸汽通畅。但内面要留一定的空间,让气流正常运行。叠好后罩紧薄膜,外加罩布,四周用沙包压紧,以防蒸汽冲力把罩膜冲飞。

  ③温度指标:烧火后,立即旺火猛攻,使温度在4小时内迅速上升到100℃。以防止升温缓慢引起培养料内耐温的微生物继续繁殖,影响培养料质量。保持温度100℃灭菌20-24小时,中途不停火,防止“大头、小尾、中间松”的现象。

  ④卸袋搬运:达到灭菌要求后,转入卸袋工序。卸袋时应套上棉纱手套以防蒸汽烫伤,如发现袋头扎口松散或袋面出现裂痕,随手用纱线扎牢袋头,胶布贴封裂口。卸下的袋子用板车运进冷却室内,车上要铺麻袋,上面遮薄膜,防止刺破料袋和雨水淋浇。

  5.接种:冷却后,放入到接种室内,准备接种。接种环节是菌棒制作中最为关键的一环。在整个接种过程都必须严格按照无菌操作要求进行,做到严和快,以减少杂菌污染。接种可用接种箱,也可全开放式接种,包括消毒、打穴接种和套外袋等环节。最终将优质的桑黄原种菌丝接种到栽培种培养基里,控制环境温度等,接种完成后,小心轻放,转移到培养房内。

  6.栽培种菌种的培育管理及检查:根据桑黄菌生长的环境条件,控制好培养房内的环境,尽可能的控制在菌丝最适生长环境下,使菌丝能更好更有的成长,并且仔细检查和筛选,最终培育出优质桑黄菌。
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