四、松杉灵芝生产、栽培管理之菌种制作-松杉灵芝栽培技术

春雨菌业

　　4.1、菌种生产

　　以木屑等农林下脚料栽培灵芝的方法称为代料栽培，主要包括菌种生产和栽培管理两个过程。菌种又分为三级种，即：一级种，也叫母种或试管种，生产上常以组织分离法获得母种。

　　二级种，我们叫它原种，是利用母种菌丝体接入木屑、谷物、小木条等培养基中所生产获得的菌种。三级种，也叫栽培种是  利用原种再扩繁所产生的菌种，可以用于直接管理出芝 ，因此也叫生产种。

　　4.1.1一级菌种生产

　　母种是采用孢子或组织分离培养获得和保存的灵芝纯菌丝体，并经栽培试验鉴定，具有优良经济性状且相对稳定的试管种。

　　一般栽培户可以从科研单位或者菌种保藏机构引进灵芝母种，技术力量较强的生产单位，也可通过组织分离制备灵芝母种。

　　设备设施：试管、工作台、高压锅、酒精灯、小工具等。

　　材料：土豆、琼脂、酵母膏、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁等。

　　培养基配制

　　（1）培养基配方

　　1、PDA培养基

　　马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。

　　2、综合马铃薯培养基

　　马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

　　3、马铃薯麦麸综合培养基

　　马铃薯（去皮）200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

　　4、马铃薯酵母粉综合培养基

　　马铃薯200克，葡萄糖20克，酵母粉4克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

　　（2）培养基的制作步骤：

　　材料选择—>准确称量—>萃取—>配制定量—>分装—>调PH—>灭菌（121°C、30分钟）—>斜面摆放（培养基长度为试管长度的2/3）。

　　（3）PDA培养基制备方法：

　　称取去皮马铃薯200克切片，置于锅内，加入水1000毫升，煮至薯片软而不烂。用4-6层纱布过滤，取滤液。向滤液中加入琼脂20克，继续煮沸至琼脂完全融化，加入葡萄糖20克，补水至1000毫升。趁热分装于试管中，装至试管长度的1/5-1/4，擦净管口，塞上棉塞或者硅橡胶塞。棉塞力求大小规范，松紧适中，不能出现缝隙。然后，在0.11兆帕、121°C条件下灭菌30分钟。

　　灭菌后、斜放试管，摆放斜面，使培养基前端蔓延至试管长度3/5，盖上纱布或灭菌的报纸（防冷凝水过多），待培养基凝固（静置24小时）后，取3-5支试管置于30°C培养3天，若无杂菌出现，表明灭菌彻底，可供接种用。

　　菌种分离与培养：

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