不同碳源对蛹虫草菌丝生长的影响

春雨菌业

韩雪1 贾成发2 陈帅1 杨研3 刘晓红2
（1 江苏省丰县职业技术教育中心，江苏丰县 221700；2 辽东学院，辽宁丹东 118003；3 辽宁丹东市公园管理处，辽宁丹东 118015）《食用菌》2012.3

　　摘要 研究了不同碳源对蛹虫草菌丝生长的影响，结果是以蔗糖为培养基的碳源最为合适，表现为菌丝生长速度快，气生菌丝量中等，密度适中，边缘整齐。在液体培养时，以可溶性淀粉为碳源培养蛹虫草菌丝可获得最大的菌丝量。
　　关键词 碳源 蛹虫草 菌丝生长
　　蛹虫草[Cordyceps militaris（L.ex.Fr）Link]又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草、蛹草菌等。蛹虫草是一种具有广阔开发前景的珍稀药用保健食品，也是我国名贵的中药材之一，其所含药用成分和多种药效可与冬虫夏草相媲美。特别是活性成分虫草酸和虫草素含量明显高于冬虫夏草[2]。天然虫草资源十分匮乏，半人工栽培生产周期长，技术不易掌握。通过液体深层培养法可获得与天然虫草化学成分相近的菌丝体，还可获得被菌体分解及未分解的营养成分、菌丝体的代谢产物，还能大大缩短生产周期。为此笔者采用液体深层培养和固体平板培养的方法对蛹虫草菌丝生长特性进行了系统研究，现将其碳源对蛹虫草菌丝生长影响的试验报告如下。
　　1 材料和方法
　　1.1 供试菌株 蛹虫草斜面固体菌种，辽东学院实验中心微生物与遗传实验室提供。
　　1.2 培养基 ① 种子活化平板培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2g，盐酸硫胺素10mg，琼脂20g，水1000mL，pH自然。② 液体发酵基础培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，磷酸二氢钾2g，盐酸硫胺素15mg，水1000mL，pH自然。③ 固体平板基础培养基：在液体培养基的基础上添加20g琼脂。
　　1.3 试验方法
　　1.3.1 菌种活化 将斜面固体菌种接种在种子活化平板培养基上，在恒温培养箱内20～22℃培养一周，菌丝长满后转色备用。
　　1.3.2 不同碳源对蛹虫草菌丝生长量的影响试验 分别以葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉等量替代基础培养基中的葡萄糖制备培养基。液体培养基分装在250mL三角瓶内，每瓶100mL，各处理5次重复，所有培养基常规灭菌。在无菌条件下，用打孔器取活化菌种接到液体培养基内，20～22℃，130r/min，震荡培养一周后将发酵液过滤，菌丝用蒸馏水冲洗数次，60℃烘干称重。
　　1.3.3 不同碳源对蛹虫草菌丝长速和菌落形态的影响采用与1.3.2相同方法制备固体平板培养基，接种，恒温培养箱内20～22℃培养一周后转色。计算菌丝生长速度，观察菌落形态。
　　2 结果分析
　　2.1 不同碳源对蛹虫草菌丝干重的影响 试验结果表明：不同碳源对蛹虫草菌丝的生长影响不同。由表1可知，以可溶性淀粉为碳源培养蛹虫草菌丝，菌丝产量最高，干重最大，蔗糖次之，与可溶性淀粉之间差异极显著；以麦芽糖为碳源菌丝产量最小；各处理之间除乳糖和麦芽糖之间差异不显著外，其余各处理间都表现为差异极显著。
　　表1 不同碳源对蛹虫草菌丝体干重的影响
　　　　　　　　菌丝干重/（g·100 mL-1）　　　平均　 差异显著
　处理　　 　Ⅰ　　Ⅱ　　　Ⅲ　　　Ⅳ　　Ⅴ　　值　　0.05 0.01
可溶性淀粉 0.1918 0.2126 0.2242 0.2032 0.2137 0.2091　a　　A
蔗糖　　　 0.1777 0.2114 0.1844 0.1932 0.1789 0.1891　b　　B
葡萄糖 　　0.1470 0.1601 0.1700 0.1532 0.1632 0.1585　c　　C
乳糖　　　 0.1265 0.1364 0.1416 0.1378 0.1409 0.1366　d　　D
麦芽糖 　　0.1269 0.1110 0.1440 0.1399 0.1402 0.1324　d　　D
　　2.2 不同碳源对菌丝长速的影响 不同碳源对菌丝生长影响很大。由表2可知，以蔗糖为碳源蛹虫草菌丝生长最快，为4.3mm/d，麦芽糖次之。生长最慢的碳源为乳糖，每天仅生长3.5mm。各处理之间除麦芽糖与可溶性淀粉，葡萄糖与乳糖之间差异不显著外，其余各处理均表现为差异极显著。
　　表2 不同碳源对菌丝生长速度的影响
　　　　　　菌丝长速/(mm·d-1) 平均 差异显著
　处理　　  Ⅰ　Ⅱ　Ⅲ　Ⅳ　Ⅴ　值 0.05 0.01
蔗糖　　　 4.1 4.1 4.5 4.3 4.5 4.3　a　　A
麦芽糖 　　3.8 4.1 4.0 4.2 3.9 4.0　b　　B
可溶性淀粉 3.7 4.1 4.0 3.8 3.9 3.9　b　　B
葡萄糖　　 3.7 3.4 3.5 3.7 3.7 3.6　c　　C
乳糖 　　　3.5 3.4 3.5 3.6 3.5 3.5　c　　C
　　2.3 不同碳源培养蛹虫草菌落形态 碳源对菌落颜色没有显著影响，菌落均显为黄色。以乳糖和可溶性淀粉做为碳源菌丝气生性最强，蔗糖和麦芽糖次之，葡萄糖最弱。以可溶性淀粉为碳源菌丝最密，麦芽糖最为稀疏。菌落边缘最整齐的是葡萄糖，可溶性淀粉次之，乳糖最差。
　　表3 不同碳源培养蛹虫草菌落形态
处理　　　菌落颜色 菌丝气生性 菌丝疏密 边缘整齐度
麦芽糖　　　黄　　　　++　　　 　*　　　 ##
可溶性淀粉　黄　　　 ++++　　　****　　　###
蔗糖　　　　黄　　　 +++　　　 ****　　　####
乳糖　　　　黄　　　 ++++　　　 **　　　 #
葡萄糖　　　黄　　　 　+　　　　**　　　 ####
　　注：菌丝气生性分为四级，由弱到强分别用+，++，+++，++++表示；菌丝疏密由疏到密分别用*，**，***，****表示；菌落边缘整齐度由弱到强分别用#，##，###，####表示。
　　3 结论
　　试验结果可知，在液体培养时以可溶性淀粉为碳源培养蛹虫草菌丝可获得最大的菌丝量。而在以蔗糖为碳源的培养基上菌丝生长最快，菌丝气生菌丝量中等，密度适中，边缘整齐。
　　在相关的蛹虫草菌丝液体发酵的配方研究试验中，试验结果不同。原因可能与所使用的菌株不同、培养时的温度、培养时间、震荡频率等培养条件有关。有关菌丝生长量与菌丝营养成分关系，还有待于更深入的研究试验。
　　参考文献
　　[1]王建芳，杨春清.蛹虫草有效成分及药理作用研究进展[J].中医药信息，2005，22（5）：30-32.
　　[2]胡昭庚.17种药用真菌栽培[M].北京：中国农业出版社，1999.
　　[3]刘晓红.人工混合料栽培北虫草技术[J].食用菌，2009（4）：58-59.