灵芝深层发酵高产菌株筛选

春雨菌业

灵芝菌丝体粉同灵芝子实体及灵芝孢子粉是目前保健和辅助治疗应用较多的保健品。采用液体发酵深层工业化生产灵芝菌丝体和灵芝代谢产物，并从中提取、纯化得到活性灵芝多糖类、三萜类、甾醇类、生物碱、核苷类、酶类等物质。灵芝菌株是保证其活性成分稳定、高产、并缩短生长周期的重要途径之一。因此，灵芝工业化发酵生产菌丝体及代谢产物，对灵芝生产菌株进行发酵筛选，优选出生物量和活性成分含量高的菌株提供灵芝深层发酵生产菌株，作为灵芝活性成分原料来源的关键。

     灵芝菌株筛选其步骤为：

      一、灵芝菌株筛选

      二、筛选突变灵芝菌株

      灵芝自古以来是我国著名的药用真菌之一。

      我国灵芝种质资源相当丰富，民间栽培和生物发酵的菌株相当多，据不完全统计现有百余株，其中有相当多的同种异名或同命异种。做投产用的灵芝菌种，除了菌种同工酶图片或DNA分子鉴别，形态分类学鉴定外，还要对灵芝菌株进行常规分离、筛选。灵芝菌株的分离、筛选（screening）是两个环节，在实际工作中不能决然分开，因为在菌株分离过程中的一些措施本身就具有筛选作用。

      灵芝菌株筛选一般包括两大部分：一是从自然界（或栽培场）中通过组织分离需要的灵芝菌株；二是将分离所得的灵芝菌株，通过初筛和复筛进行筛选，从初筛中淘汰90%～95%不符合要求的菌株，剩下的菌株进行复筛。观察产量与活性成分含量水平及稳定性，决定是否作为投罐使用的菌株。

      初筛是一种快速、简便又较为准确的筛选方法，一般是采用恒温冷冻摇床，在相同的培养基和统一培养条件（温度、振幅、生长周期等）下进行培养，观察灵芝菌丝生长速度和产量、镜检锁状联合；记录活性物质如灵芝多糖、灵芝三萜等其他活性成分的数据，淘汰表现性差的菌株，从中优选菌株再进入重复实验和观察，通常称为复筛。将复筛菌株再同一条件下液体发酵培养7日，分别收集菌丝和发酵液。菌丝干燥后测定干重和胞多糖，发酵液测胞外多糖或其他活性成分含量等数据，进行综合评选，最终选择优良灵芝菌株用于发酵生产。

      如何筛选突变灵芝菌株

      通过各种手段改变菌体的遗传性之后，从数量庞大的菌株中有效地筛选出突变菌株，其常见方法有自然育种、诱变育种和杂交育种等。自然育种是菌种最普通、最有效的选育方法。诱变菌种是育种是一种常规、有效的方法，如某些化学、物理因素能诱发基因突变，我国近年还发展了有关离子注入的诱变、太空育种等一类高效、方便、安全、无污染的新型诱变源，引起了科学工作者的重视。

      原生质体技术是今年历来迅速发展起来的细胞生物育种新技术，是灵芝菌种选育与遗传研究的一个重要组成部分。营养到原生质形成的因素很多，包括菌龄、酶的种类、浓度、酶解时间、温度、渗透压稳定剂的选择等。

      目前，灵芝原生质育种有两个方法：

      第一，原生质融合。

      第二，紫外线对原生质的诱变。

      突变的灵芝菌种通过初选、复选程序后，选择优良菌株，必须通过DNA分子鉴别，证明具有优势的杂种出现的双亲不具备的谱带，才能确定为新灵芝菌株。