灵芝菌丝深层发酵培养条件

春雨菌业

灵芝菌丝深层培养过程中，除了满足菌体的营养需求外，还要维持适当的培养条件（温度、氧气、酸碱度等），这对提高灵芝菌体产量或有效物质的积累有重要作用。

      一、温度

      灵芝深层培养温度范围为22～25℃，以2730℃为最适。低于27℃菌丝生长缓慢；高于30℃则菌丝容易老化。随着时间延长菌丝逐渐趋于自溶，发酵液的颜色变得较深；36～38℃菌丝停止生长，40℃即死亡。

      温度能影响灵芝多糖的产量。在发酵过程中，前期030小时以稍高温度促进菌丝迅速生长，这样能缩短非生物合成的周期，在30～150小时以稍低的温度尽可能延长有效物质的分泌期。150小时以后，温度稍微高些，以刺激有效物质的分泌。后期提高温度会促使菌丝衰老较快，但因接近放罐，影响不大。

      二、通气

      灵芝菌丝体的新城代谢同样需要吸收氧气。通气的目的是保证最好的氧溶解性，并和细胞接触，以便更好地吸收液体中的氧，此外还接排除细胞二氧化碳和代谢产物。深层培养供氧状况对灵芝菌丝体生长和有效物质积累有较大意义，特别是发酵培养初期12～60小时，由于菌丝量显著增加，菌丝的摄氧率达到高峰，这时对溶解氧极为敏感。在这阶段若是出现降低溶解氧的情况，如停止供气，一次性大量加入消抹油或补料等都有可能引起异常发酵，出现菌丝自溶或原生质凝聚，这时导致明显代谢变化，产量下降，制止发酵失败。

      灵芝深层培养的通气量大小应控制适合。溶解氧的大小可由特定的测定仪测定；也可采用亚硫酸盐氧化法测定，通气量大小可通过流量计来控制。在发酵初期，菌丝量不多的情况下，通气量可少些；到了菌丝生长旺盛期，由于菌丝大量增殖，通气量就大一些；发酵后期菌丝逐渐衰老，代谢能力弱，通气量相对就减少。

      三、搅拌

      在灵芝深层发酵生产菌丝体时需大量供氧，由于氧难溶于水，为保证菌丝能充分利用溶解的氧，必须通过搅拌。发酵罐的搅拌装置的作用，就是通过搅拌把氧更好地溶解在液体中，增加了菌体和气-液接触。此外，通过搅拌可排除二氧化碳和代谢产物，并保持菌丝体处于均匀悬浮状态。

      在通气效果差的情况下，可增加搅拌补偿。同时根据培养基的性质，决定搅拌器形式、搅拌流型等问题。灵芝菌丝深层培养基粘度大，液面高，为了达到良好的搅拌效果，常采用两档或三档搅拌器，大型发酵罐多至四档。

      福建省三明市真菌研究所所采用无机械搅拌、通气培养灵芝菌丝的试验，结果同装有搅拌装置的效果基本一致。

      四、消沫

      灵芝深层培养基中含有蛋白质类物质，在通气和搅拌下易形成泡沫，致使培养液上升，若不加以控制会造成大量的逃液，增加了染菌的机会。同时，由于泡沫过多，还会影响通气和搅拌的正常进行。发酵过程的泡沫产生主要原因有两点；一是与通气搅拌程度有关，二是与培养基所采用原料性质有关。灵芝深层培养料中含有蛋白胨、玉米浆、花生粉、黄豆粉、酵母粉等。在通气和搅拌的情况下，很容易产生泡沫，而糖类物质本身起泡能力差。

      消除泡沫的方法有机械消沫法和消沫剂消沫两种。机械消沫的有点在于不需要从外面加入物质，因此减少染菌机会，但消沫效果不如消沫剂迅速可靠。灵芝的深层培养的消沫剂为植物油，用量为0.03%～0.035%，加油过量也会对菌丝体生长与代谢有一定的影响。

      五、PH值

      灵芝深层培养要求一定的PH值范围，灵芝菌丝最适生长的PH5.0～.60，发酵初期PH4.0～5.4左右，到了发酵中期菌丝体生长旺盛，菌体干物质和有效成分的积累，PH值几急剧下降倒2.5～3.5之间，进入发酵后期菌丝生长缓慢，出现菌丝自溶，PH值回升。

      在发酵过程中的PH值的变化和培养基的组分有密切关系。在发酵过程中遇到PH值急剧下降或上升，必须注意调节。其方法有三：
      1.选择合适的培养基
      2.借助PH值测定仪，控制加入酸或碱（氨水）量，调节到合适的PH值范围。
      3.加入磷酸盐、碳酸钙等缓冲物质。

      六、种龄与接种量

      灵芝菌丝体以不同种龄及不同接种量，控制28℃在摇床上培养5天，最后测定菌丝体干重。

      结果表明，摇瓶种龄以72～96小时，此时菌丝正处于生长繁殖期。繁殖罐种龄一般为48小时左右。接种量的大小，决定于菌种生长速度，一般接种量5%～10%，接种量少了菌丝体生长速度慢，会延长发酵周期；接种量少了菌丝体生长速度慢，会延长发酵周期；接种量太多则使菌丝体生长过快，培养液粘度增加，造成氧气不足，菌丝老化快，既降低有效物质的积累，又给后处处理带来困难。