灵芝多糖 灵芝三萜含量的测定

春雨菌业

灵芝多糖、灵芝三萜是灵芝及灵芝孢子中重要的化学成分。其含量及活性的高低，直接决定灵芝制剂的作用效果。

    （一）灵芝多糖、总糖含量测定

    1.采用苯酚-浓硫酸法

    苯酚-浓硫酸法可与游离的葡萄糖或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，已糖在490nm处（戊糖及糖醛酸480nm）有最大吸收，吸收量与糖含量成线性关系。

    （1）标准曲线制作：准确称取标准葡萄糖（或葡聚糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，1.2m，l1.4ml，1.6ml，1.8ml，各以水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，静止10分支箱，摇匀，室温放置20den中以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为白色，以横坐标为多糖魏克书，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

    （2）样品处理：取上述的干灵芝菌丝粉末0.3g，置于50ml干燥的容器瓶中，加水约40ml，于沸水浴中加热2小时，并不断震摇提取、冷却至室温后定容至刻度，将上述提取液于4000r/min离心15分钟，取上清液备用。

    （3）样品的测定：吸取样品液1.0ml（相当于40微克左右的多糖），按上述步骤操作，测光密度，以标准曲线计算多糖含量。

    2.3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法 在碱性溶液中，3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

    3.计算 总糖和还原糖的测定分别采用上述的方法。多糖=总糖-还原糖。

    （二）灵芝三萜含量的测定

    1.样品的制备

    取烘干的灵芝菌丝粉碾磨0.3g，菌丝：95%=1:50（w/v），置于50ml容量瓶中加水至刻度，在超声波仪中超声破壁2.5小时后，于4000r/min离心10分钟，取上清液备用。

    2.样品测定

    采用752型分光光度计，标准溶液用齐墩果酸，用甲醇定容；香草醛溶液为5%冰醋酸，通过比色法测定灵芝三萜含量。