密环菌的栽培技术

春雨菌业

（一）菌种分离与培养
１．菌种来源
从我国各地培育蜜环菌情况看，对菌种来源可分为三类：一是采取野生菌种；二是从外地单位引入菌种，再进行扩大培养；三是纯菌种分离和培养。但以纯菌索粗壮、生长快、发射荧光强、抗逆性好，适应性强的蜜环菌作为菌种。
２．纯菌种的分离和培养
菌种组织分离与培养（母种）
配方一
马铃薯（去皮）２００克 ; 葡萄糖２０克 ; 琼脂２０克 ; 水１０００毫升
配制方法：将马铃薯切成小块放入锅内，加水 1000 毫升，煮沸２０分钟，用纱布过滤，补水到 1000 毫升 , 放入切碎的琼脂和葡萄糖，加温溶解后，ｐＨ值自然，将培养基分装三角烧瓶内或分装于试管中，灭菌、放斜面、冷却接种．培养等，与其它食用菌的培养基配制及制种方法均相同。
配方二
麦麸４０克；葡萄糖２０克；琼脂２０克；水１０００毫升
配制方法：麦麸加水１１００毫升煮微２０分钟，用双层纱布过滤，滤液补水至１０００毫升，放入琼脂，加热溶解后，再加葡萄糖煮至全溶，ｐＨ值自然。然后分装试管或三角烧瓶，再高压灭菌，放斜面、冷却、接种、培养，即获得母种。
如果是药用，只培养蜜环菌丝体，也就是进行一级扩大培养和二级扩大培养。
３。一级扩大培养用斜面纯菌种接种在一级种子培养液中，在一定的条件下进行一级扩大培养。
（１）一号种子培养液
配方：葡萄糖２０克；磷酸二氢钾２克；磷酸氢二钾１克；硫酸镁１．５克；黄豆饼粉或花生饼粉１０克；酵母粉或麦芽１克一２克维生素 １ １０毫克；２０％马铃薯汁１０００毫升配制后调ＰＨ值到５．５，分装于５００毫升的三角瓶内，每瓶装１５０毫升，高压灭菌，备用。
（２）二号种子培养液
配方：马铃薯（去皮）２００克；葡萄糖２０克；硫酸镁０．５克；磷酸二氢钾１ . ５克，蛋白胨３克；维生素Ｂ1 １０毫克，清水１０００毫升培养液培养后，ｐＨ值自然，分装于５００毫升三角烧瓶中，每瓶装１５０毫升，高压灭菌，备用。
（３）三号种子培养液
配方：麦麸５０克；葡萄糖２０克；硫酸镁０．５克；磷酸二氢钾１ .５ 克，蛋白胨５克，清水１０００毫升
配制方法：先将麦麸水煮２０分钟，用纱布过滤，补水至１０００毫升，再将其经配料加入滤液中溶解，ＰＨ值自然，分装于５００毫升的三角烧瓶内，每瓶装５０毫升，高压灭菌，备用。
接种方法：在无菌条件下用接种钩将斜面菌种打碎，然后转移到培养瓶内。装量１５０毫升的培养瓶可转移一个斜面的菌种，装量为５０毫升的瓶，可转移１／３斜面的菌种。接种后用４层纱布夹回层无菌棉塞瓶口。接种完毕要扎紧瓶口，置室温２５度的摇床上进行振荡培养。培养１．５天一２天后，可见培养液发出荧光，３天一４天培养液呈米黄色，荧光增加，轻摇培养瓶时，液面布满荧光点，５天一７天后荧光逐渐减弱。如果发现培养液的荧光突然消失，并出现大量泡沫，就表明已被杂菌污染，应立即淘汰。培养液的荧光最强时，菌丝生长繁殖最旺盛，应停止培养，即为一级种子。
优质的一级种子液粘稠，呈米黄色，或象米粥。菌液中长有黄豆粒大小的菌球体，如培养时间过长，菌液老化，菌球体则变为中空、表面光滑的球体，但这种菌液仍能发微弱荧光。被污染的菌液，有时也有光滑的小球体，但不发荧光。
４．二级扩大培养
为大量培养纯菌种，或大量培养药用的蜜环菌丝体，可在１０００毫升一５０００毫升的大烧瓶中进行二级扩大培养，也可利用发酵罐进行培养，因此，也叫发酵培养。
（１）一号发酵培养液
配方：葡萄糖２０克；酵母粉３克；磷酸二氢钾２．５克；硫酸镁１．５克；麦麸２０克；维生素Ｂ 1 １０毫克；２０％马铃薯汁 1000 毫升培养液配制后，ｐＨ植调至５．５，分装，高压灭菌，备用。
（２）二号发酵培养液
配方：葡萄糖１％；白蔗糖２％；磷酸二氢钾０．１５％；硫酸镁０．０７５％；黄豆饼粉１％；花生饼粉１％配制后． P Ｈ值自然，分装，高压灭菌，备用。接种时，要严格按无菌制作的程序进行。用移液管将菌种接入一级种子液，在２５度条件下培养３天一４天
5 ．种子液培养条件
（１）一级种子
温度２４－２６度，在旋转式摇床上培养１２０天一１４８天，偏心距为４厘米一６厘米，转速２４０次／分钟。
（２）二级种子
温度２６－２８度，在往复式床上培养７２小时一 96 小时，冲程为７厘米，转速为 90 次／分钟。
（３）发酵罐
温度２６－２８度，容量为４０立升的，投料２０立升，搅拌速度为 200 转／分钟，通气量为１： 0 ．５－１： 0 ．８，培养９６－１２０小时。用乙醇提取，再浓缩，将提取物人药。６．二级团体扩大培养为了利用蜜环菌伴栽天麻，可将蜜环菌采用固体扩大培养，它比液体培养效果好。
二级固体菌种培养基（即原种培养基）
配方（１）：杂木屑或玉米芯粉６８％；玉米粉２０％；麦麸１０％；蔗糖；２％。
配制方法：清水拌料，含水量６５％－７０％，装瓶或装袋，灭菌，冷却后接种，在２０－２５度条件下培养２５天一３０天，即成二级固体菌种。
配方（２）：杂木屑４６％；玉米轴粉４０％；麦麸１０％；蔗糖２％；骨粉１％；石膏粉１％清水拌料，含水量６５％－７０％，装瓶或装袋，灭菌，冷却后接种（方法同于一般食用菌），在２０－２５度条件下培养２５％－３０天，菌丝长满培养基，即为二级固体菌种。
（二）扩大生产
１．菌材和基础培养料的选择
（１）菌材的选择
凡是阔叶树种（松杉木不能用）都可以用来培养蜜环菌，也可作为培养天麻的菌材。未接菌的木棒或树枝，统称为菌材。把木棒接植蜜环菌，长出菌索，带有菌索的木棒称为菌棒。菌棒一般直径４厘米一１０厘米，主要用于培养天麻。如果在２厘米一３厘米粗的树枝上接种蜜环菌，树枝上长出菌素，这样的树枝称为菌技，是培养天麻的补充材料。
（２）基础培养料的选择
基础培养料是蜜环菌和天麻生长发育繁殖所必需的基本物质条件。基础培养料的优劣将直接影响蜜环菌丝和天麻生长发育的质量，所以，一定要选择透气性能良好，有机质丰富，并疏松、易于渗水和保温，酸碱度适宜的培养料，基础培养料的配制方法如下：
天然腐殖土：即山林中的腐殖土，土质疏松，团粒结构良，含有丰富的有机营养和无机盐类，透气和保水性能强，是较理想的基础培养料。
半腐熟落叶加沙：晚秋收集阔叶树落叶，加适量水，堆坑封盖腐熟。来年春将树叶取出加小米大小的砂子。树叶和砂子的比例为５：１，作为基础培养料。这种培养料体轻、疏松、营养丰富。
沙质土壤：土壤疏松、透气性和渗水性良好。
木屑加砂：选择阔叶树的粗锯末加干净的粗细混合砂。砂粒象高梁粒大小，事先将砂粒用清水洗净再用，木屑和砂的比例为２：１或３：１。
稻壳加砂：用新鲜的稻壳加干净的小米大小或高梁粒大小的砂子，稻壳和砂的比例为３：１。
２．培养菌棒和菌枝
为栽天麻时有充足的优质菌棒和菌枝，必须选择适当的培菌时间。最好在７月份开始培养菌棒、菌枝（气温在２３－２５度，湿度在６５％－７０％为宜）。８月中旬可以进行一次扩大培养，１１月份开始栽天麻。也可在９月份开始在室内培养。此时室内自然温度在２０度以下，菌棒、菌枝发菌较慢，但菌丝生命力强，菌索健壮。用这种菌棒、菌技在第二年３月份栽天麻，其效果良好。
培养菌棒和菌枝的方法相同，可以同时进行。接种时可采用打孔接种法，先将木棒和树枝截成段，再用打孔器打孔（每隔约６厘米一９厘米打一个孔），象黑木耳段木栽培法那样，向孔内接菌种，进行培养。也可以采用砍鱼鳞口接种法，将菌材截成５０厘米一 60 厘米长的段，用刀每隔９厘米一１２厘米砍一个鱼鳞口，深度以露出木质部０．５厘米为宜。
培养方法：可以采用坑培法。半坑式培养法、地面砌池培养法等多种形式，但其培菌方法是相同的。下坑（池）培养时，先向坑（池）底层铺一层基础培养料，再放一层菌棒、菌技，向接种孔或鱼鳞口内塞满蜜环菌原种菌种，再撒上薄薄一层原种菌种，再铺上一层培养料。第二层直到第五、六层，方法与第一层相同。如果不用菌种，也可用切碎的带菌索的段木，放在菌棒、菌枝旁边，也能起到菌种扩大培养作用，也可用伴栽天麻的旧菇木和新菌材穿插排放，最上层同样铺上６厘米厚的基础培养料，浇透水（土壤含水量４０％左右），再用土封顶。在２０－２５度条件下，１个月左右，即长好蜜环菌菌索。这时可将菌棒、菌枝挖出，用作伴栽天麻和专一培养蜜环菌子实体食用。
（三）蜜环菌的利用
常食蜜环菌于实体（菇），能治疗夜盲症，促进眼明，还能医治人体皮肤干燥等症。