灵芝耐药性研究

春雨菌业

第4卷第2期

2005年5月

淮阴师范学院学报(自然科学版)

JOURNAL OF HUAIYIN TEACHERS COLL EGE(NATURAL SCIENCE EDITION)

Vol14 No12

May. 2005

温 鲁,葛宜和,邱 燕

(淮阴师范学院生物系,江苏淮安 223300)

摘 要:为探索生料栽培灵芝的可行性,研究了6种杀菌剂对杂菌的抑制作用以及对灵芝菌

丝的影响.其中代森锰锌和克霉灵对灵芝菌丝生长影响很小,与熟料栽培无显著差异,可供灵

芝生料栽培使用;氢氧化铜,高锰酸钾,硫粉,百菌清对灵芝菌丝生长有不同程度的抑制,与熟

料栽培有显著差异,因而不适用于灵芝的生料栽培.

关键词:杀菌剂;灵芝;生料栽培

中图分类号:S56713 文献标识码:A 文章编号:167126876(2005)0220159204

收稿日期:2005203216

基金项目:江苏省淮安市农业发展基金资助项目(HAN0221)

作者简介:温鲁(19472),男,贵州普定人,副教授,主要从事药用真菌等研究.

灵芝是名贵的药用真菌,具有很好的医疗保健功效,千百年来备受中华民族的推崇.灵芝以前主要

靠野生采集,近年人工栽培技术获得突破,生产发展很快,已形成较大的生产规模.目前灵芝栽培都是熟

料栽培,尽管成功率高,但能源消耗,技术要求和生产成本都很高,影响了灵芝生产的进一步发展.如能

实现灵芝的生料栽培,就可以节省能耗,简化栽培技术,大幅度降低生产成本.生料栽培必须解决杂菌污

染问题,但在防止杂菌污染的同时,又不能影响灵芝的生长.为达到这一目的,本研究选择6种杀菌剂:

代森锰锌[ 1 - 4 ],百菌清[ 1 - 4 ],氢氧化铜[ 1 ,2 ,4 ,5 ],硫粉[ 3 ],克霉灵和高锰酸钾,研究其对灵芝菌丝生长的影

响以及对杂菌的抑制情况,以求为今后实现灵芝的生料栽培创造条件.

1 材料和方法

111 材料

111. 1 菌株

美国灵芝,引自北京农业大学生物学院.

11112 杀菌剂

硫粉,淮安市清江果园配制波尔多液所用原料;克霉灵(40 %二氯异氰尿酸钠)可溶性粉剂,运城市

瑞达丰农化有限公司生产;高锰酸钾,市售分析纯试剂.

75 %达科宁(Dacotech)可湿性粉剂(百菌清),日本SDSBiotech K K公司生产;77 %可杀得2000(Ko2

cide)可湿性粉剂(氢氧化铜),美国固信公司生产;大生M245(Mancozeb)超微可湿性粉剂(70 %代森锰

锌),天津施普乐农药技术发展有限公司生产.

以上杀菌剂处理浓度见表1.

112 设备

LDZX240B型自动蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂);洁净工作台(北京冠鹏净化设备有限责任公

司); GNP29160恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司);其余玻璃器皿等均为实验室常规仪器.

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113 方法

培养基配方为棉籽壳90 %,玉米粉10 % ,另加1 %过磷酸钙,料水比为1:113.除硫粉不溶于水直接

拌入干料外,其余杀菌剂先溶入水中再拌料,拌匀后分装于Φ20 mm×200 mm试管,料层高度为5 cm ,分

两批在洁净台中按无菌操作要求接种.第一批在当天接种,第二批在一天后接种,所用菌种为美国灵芝

麦粒种,以不加药剂的生料(CK1)和经高压灭菌的熟料(CK2)作对照.以上每处理3重复,置25℃下恒温

培养,每天观察并记录灵芝菌丝的生长量,生长势以及杂菌污染情况.

表1 杀菌剂处理浓度

杀菌剂处理浓度/(‰)

硫粉1125(800)110(1000)0183(1200)

克霉灵210(500)1125(800)110(1000)

高锰酸钾1125(800)110(1000)0183(1200)

达科宁(百菌清)1125(800)110(1000)0183(1200)

可杀得(氢氧化铜)110(1000)0185(1200)01625(1600)

大生M245(代森锰锌)1125(800)110(1000)0183(1200)

注:括号内数字表示稀释倍数.

2 结果与分析

211 结果

21111 杀菌剂对灵芝菌丝的影响

试验结果见表2.

表2 杀菌剂对灵芝菌丝生长的影响

杀菌剂

处理浓度

(‰)

菌丝平均长速

(mm/ d)

差异显著性

0105 0101

灵芝菌丝

生长势

杂 菌

污染情况

代森锰锌11254121aA+ + + +0

1104136aA+ + + +0

01833193aA+ + + +0

克霉灵2104100aA+ + + +3

11254114aA+ + +3

1103171aA+ + +33

硫粉11251114aA+333

1103143abA+33

01834128bA+ +33

百菌清11253100aA+ +0

1102193aA+ +0

01834114aA+ +0

高锰酸钾11253157aA+33

1101157abA+333

01834129bA+33

氢氧化铜1100aA03333

01830aA03333

016250aA03333

CK102176--+3333

CK204193--+ + + + +0

注: 1)本表是接种后7天的情况,各处理结果为3重复的平均值; 2)当天接种生长情况明显好于隔一天接种,

本表结果均为当天接种生长情况; 3)字母相同表示杀菌剂的不同处理浓度间无显著或极显著差异; 4)"+"

表示菌丝生长细弱,"+ +"表示菌丝生长较弱,"+ + +"表示菌丝生长中等,"+ + + +"表示菌丝生长旺盛,

"+ + + + +"表示菌丝生长很旺盛; 5)"3"表示略有杂菌污染,"33"表示污染较轻,"333"表示污染较

重,"3333"表示污染很重.

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21112 杀菌剂间差异显著性

试验结果见表3.

表3 杀菌剂间差异显著性

杀菌剂

菌丝平均长速

(mm/ d)

差异显著性

011

差异显著性

0101

代森锰锌4117abAB

克霉灵3195abAB

硫粉2195bAB

百菌清3136bAB

高锰酸钾2154cB

CK12176bAB

CK24193aA

注: 1)菌丝长速为各处理的平均值; 2)氢氧化铜的菌丝长速为零,因此未列入; 3)字母相同表

示杀菌剂间无显著或极显著差异.

212 分析

21211 不同杀菌剂对灵芝的影响

由表2,表3可知,6种杀菌剂对灵芝菌丝生长的影响程度不同,其中菌丝平均长速位于前三位的是

代森锰锌,克霉灵和百菌清.与CK2(熟料)相比,代森锰锌对灵芝菌丝生长影响很小,菌丝生长旺盛;克

霉灵对灵芝菌丝生长影响较小,菌丝长势中等;百菌清对灵芝菌丝的生长有较明显的抑制作用,菌丝长

势弱,且呈索状生长;氢氧化铜,高锰酸钾和硫粉对灵芝菌丝的生长影响较大,分别表现为菌丝不生长,

生长细弱和较弱.

通过最小显著差数法(LSD法)进行差异显著性测定,对灵芝菌丝生长的影响,代森锰锌,克霉灵和

CK2无显著差异;百菌清,硫粉与CK1(生料)无显著差异;高锰酸钾与CK1有显著差异,与CK2有极显著

差异.同一杀菌剂不同处理浓度之间,除硫粉和高锰酸钾外均不存在显著和极显著差异.硫粉在1125‰

和0183‰浓度时,灵芝菌丝平均长速为1114 mm和4128 mm ,有显著性差异;高锰酸钾在110‰和0183‰

浓度时,灵芝菌丝平均长速为1157 mm和4129 mm ,亦有显著性差异.

212. 2 杀菌剂对杂菌的抑制

6种杀菌剂对杂菌的抑制也有显著差异.其中代森锰锌,百菌清对杂菌有非常明显的抑制作用,没

有杂菌污染;克霉灵对杂菌具有明显抑制作用,仅有轻度污染;硫粉,高锰酸钾对杂菌有较明显的抑制作

用;氢氧化铜对杂菌只有很小的抑制作用,污染严重.

21213 灵芝菌丝后期生长情况

接种后7天的情况如表2所述,7天后的情况有所不同.高锰酸钾,CK1,硫粉,百菌清处理,分别在

第8天,第9天,第10天,第13天出现明显的拮抗线,灵芝菌丝基本停止生长.代森锰锌1125 ,110 ,

0183‰处理的灵芝菌丝均可满管,满管时间分别为18天,15天,13天;克霉灵210 ,1125 ,110‰处理的灵

芝亦可满管,满管时间分别为16天,18天,19天;CK2满管时间为11天.

3 小结与讨论

研究结果表明,在参试的6种杀菌剂中,代森锰锌和克霉灵的各处理浓度,对灵芝菌丝生长的影响

相对较小,灵芝菌丝最终均能满管;但毕竟是生料栽培,培养料未经高温熟化降解,所以还不能达到熟料

栽培的效果,满管所需时间较熟料长一些.经差异显著性测定,代森锰锌和克霉灵对灵芝菌丝生长的影

响,与熟料之间无显著差异,故这两种杀菌剂可望在灵芝生料栽培中发挥作用.

氢氧化铜,高锰酸钾,硫粉,百菌清的各处理浓度,对灵芝菌丝生长都有较强的抑制作用,灵芝菌丝

表现为不萌发(氢氧化铜)或生长细弱,并且在生长过程中产生明显的拮抗现象,导致灵芝菌丝最终不能

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满管.除百菌清外,其他三种杀菌剂对杂菌无明显抑制,杂菌污染严重.百菌清对灵芝和杂菌均有较强的

抑制作用,各处理虽无杂菌污染,但灵芝菌丝长势弱且呈索状生长.故这4种杀菌剂不适合在灵芝生料

栽培中使用.

本文筛选出适用于灵芝生料栽培的两种杀菌剂:代森锰锌和克霉灵,尚属实验室成果,至于能否在

生产上应用于灵芝的生料栽培,还有待进一步的试验研究.

参考文献:

[ 1 ] 蒋冬花,张萍华,方国伟,等.五种杀菌剂对灵芝菌丝生长的影响[J ] .浙江师大学报, 1999 ,22(4):7680.

[ 2 ] 蒋冬花.三杀菌剂对灵芝栽培中4种霉菌生长的影响[J ] .植物保护学报, 2000 ,27(3):287288.

[ 3 ] 徐映明,郑斐能.国产农药应用手册[M] .北京:中国农业科技出版社,1990.

[ 4 ] 张友军,吴青君,芮昌辉,等.农药无公害使用指南[M] .北京:中国农业出版社,2003.

[ 5 ] 赵桂芝.百种新农药使用方法[M] .北京:中国农业出版社,1997.

Assessment in Drug Resistance of Ganoderma Lucidum

WEN Lu , GE Yi2he , QIU Yan

(Department of Biology , Huaiyin Teachers College , Jiangsu Huaian 223300 , China)

Abstract : To explore the feasibility of cultivation of Ganoderma Lucidum with raw materials , six sterilizing agents

were evaluated their effects on the mycelium growth of G. Lucidum and other pathogens. The results showed that the

medium processed with Mancozeb or KEMEILING had no difference with the autoclaved medium in cultivating G.

Lucidum. The others including Kocide , potassium permanganate , sulfur powder and Dacotech had some negative ef2

fects on the mycelium growth of Lucidum and were not suitable for cultivation of G. Lucidum.

Key words : sterilizing agents ; Ganoderma Lucidum ; cultivation in raw materials

[责任编辑:蒋海龙

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