灵芝多糖类定量测定 蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法
由于灵芝的种类、产地、分离提取方法各异，所获灵芝多糖含量不同，下面介绍下两种常见灵芝多糖的测量方法蒽酮-硫酸法（药典检测方法）、苯酚-硫酸法。 （1）蒽酮-硫酸法 该法为《中国人民共和国药典》规定方法，其原理是糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合而显色，其显色的深浅与灵芝多糖含量呈线性关系。 【对照品溶液的制备】精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 【标准曲线的制备】分布精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、和1.2ml，置于10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液（精密称取蒽酮0.1g，加80%的硫酸溶液100ml使溶解、摇匀）6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为白色，在紫外-可见分光光度计上，于625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 【供试品溶液的制备】精确称定灵芝粉末1g，置蒸馏瓶中，加水40ml，沸水回流提取1小时，重复1次，两次提取液均转移至100ml容量瓶中，定容，摇匀。取40ml加200ml无水乙醇沉淀，过夜。4000rpm离心20分钟。沉淀定容至50ml，摇匀。 【样品测定】精确量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度。 【换算因子的测定】精密称取GL-pp10.3mg与10.4mg，分别置于100ml容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，作为多糖供试液。精密吸取2ml，按照标准曲线项下的方法测定吸光度，计算出多糖溶液中葡萄糖含量的平均值，并计算出换算因子：f=W/CD，式中W为多糖量（ug），C为多糖溶液中葡萄糖含量，D为多糖的稀释因素。 测定结果为f=2.0428（n=6） 【计算】S=f×n/N×100% S—灵芝子实体中多糖百分含量； n—从标准曲线上读出供试品溶液中多糖浓度（以标准葡萄糖计）； N—供试品溶液浓度； f—换算因子； （2）苯酚-硫酸法：苯酚硫酸试剂可与寡糖、多糖起显色反应，其吸收值与糖含量呈线性关系。 【对照品溶液的制备】精确称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖20mg，置500ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得每1ml含0.04mg的溶液。 【标准曲线的绘制】分布精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml和1.6ml，分别以水补至2.0ml，需加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,静置10分钟，摇匀，室温放置20分钟，于紫外-可见分光光度计490nm测光密度，以水为空白，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 【供试品溶液的制备】精确称定灵芝粉末1g，置蒸馏瓶中，加水40ml，沸水回流提取1小时，重复1次，两次提取液均转移至100ml容量瓶中，定容，摇匀。取40ml加200ml无水乙醇沉淀，过夜。4000rpm离心20分钟。沉淀定容至50ml，摇匀。 【样品测定】精确量取供试品溶液2ml，置10ml具塞管中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml”起，依法测定吸光度。 【换算因素的测定】精密称取GL-pp10.3mg与10.4mg，分别置于100ml容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，作为多糖供试液。精密吸取2ml，按照标准曲线项下的方法测定吸光度，计算出多糖溶液中葡萄糖含量的平均值，并计算出换算因子：f=W/CD，式中W为多糖量（ug），C为多糖溶液中葡萄糖含量，D为多糖的稀释因素。 测定结果为f=2.0428（n=6） 【计算】S=f×n/N×100% S—灵芝子实体中多糖百分含量； n—从标准曲线上读出供试品溶液中多糖浓度（以标准葡萄糖计）； N—供试品溶液浓度； f—换算因子； 灵芝多糖来源有三种：灵芝子实体多糖、灵芝菌丝体多糖及灵芝发酵液多糖。多糖大多具有提高免疫功能的作用，这与灵芝滋补强壮、扶正固本的作用是一致的。认为多糖和三萜的含量做为栽培和野生灵芝及其相关制剂的质量控制标准。
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